細(xì)胞名稱:大鼠乳腺成纖維細(xì)胞

貨號(hào)：BY-Q14210

種屬來源:大鼠

組織來源:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常乳房組織

疾病特征:正常原代細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài):長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞

生長特性:貼壁生長

培養(yǎng)基:我們推薦使用EliteCell原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

作為體外培養(yǎng)原代乳腺成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基,。

生長條件:氣相：空氣,，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, 

傳代方法:1：2至1：6,，每周2次,。

凍存條件:90% *培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞鑒定:纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,，       經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

QC檢測:    不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌

特點(diǎn)和簡介

乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,。淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔，一端連于胸肌筋膜,，另一端連于皮膚,，將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中。乳腺是哺乳動(dòng)物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長,、功能分化和退化過程的器官之一,。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間，形成許多間隔,，這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用,，而纖維結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成的。

培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇大鼠乳腺成纖維細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

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