ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒,、ELISA Kit,、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),，得到多數(shù)科研工作者的認(rèn)可及推崇,，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展,。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存，操作簡(jiǎn)便,，結(jié)果判斷較客觀等因素,，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。

應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)：

免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料,，如抗原抗體，酶等,。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備,。近年來(lái),，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn),。

ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,，這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,，分別來(lái)自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面,，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后,，酶結(jié)合物就會(huì)與第一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液,，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性,。

用途：

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高,，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度,。 ELISA可用于測(cè)定抗原,，也可用于測(cè)定抗體。

產(chǎn)品特點(diǎn)

一,、高效,、靈敏、特異的抗體,；

二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三,、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；

四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型,；

五,、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

檢測(cè)方法：

一,、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）,。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。

二,、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml,，4℃過(guò)夜,；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,；

4.（同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,；

5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌；

6.’最后一遍用DDW洗滌,。

其余步驟同“雙抗體夾心法"的4,、5、6,。

（檢測(cè)方法后續(xù)）

臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展,，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用,。分子生物學(xué)正在并最終肯定會(huì)讓對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識(shí)，其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,，對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性,。

應(yīng)用領(lǐng)域

ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏,、特異,、簡(jiǎn)單、快速,、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn),。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，

可概括四個(gè)方面：

1,、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位,。

2、研究抗酶抗體的合成,。

3,、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

4,、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份,。