ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)溫育解讀

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加酶結(jié)合物和顯色劑后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育,。

溫育的時(shí)間選擇:

溫育這一步是ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘-1小時(shí),，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1-2小時(shí)才能有較wan全的結(jié)合,，低于1小時(shí)，可能會(huì)影響測定下限,。

ELISA屬固相免疫測定,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn),。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育,。

溫育所需時(shí)間與溫度成反比,，即溫度越高,，則所需時(shí)間相對(duì)較短,。

溫育的溫度選擇:

溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。

在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂feng,。為加速反應(yīng),，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應(yīng)4℃更為che底,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以形成最多的沉淀,。但因所需時(shí)間太長，在ELISA中一般不予采用,。