很多試劑檢查都涉及到規(guī)范曲線的疑問,，ELISA試劑盒規(guī)范曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果,，乃至關(guān)系到試驗的成敗,，那么究竟怎么繪制或制造規(guī)范曲線呢,？

一,、做規(guī)范曲線樣品檢查時有幾個疑問需要注意

1、樣品的濃度等目標是依據(jù)規(guī)范曲線計算出來的,，所以首先要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事,，不然后邊的試驗成果無從談起。

2,、設(shè)置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個對比大的跨度，而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度,，即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模以內(nèi),，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規(guī)范曲線,，盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度最陡段,，即曲線簡直成直線的規(guī)模內(nèi)。

3,、選用倍比稀釋法制造規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度,，這么就能夠確保規(guī)范樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的違背。

4,、檢查規(guī)范樣品時,，應按濃度遞加順序進行,，以削減高濃度對低濃度的影響。

5,、規(guī)范曲線的樣品數(shù)通常為7個點,，但最少要確保有5個點。

6,、做出的規(guī)范曲線相數(shù)因試驗要求不一樣而有所變化,，但通常來說，相數(shù)R最少要大于0.98,，對于有些試驗,，最少要0.99乃至是0.999.

二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合

在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程的擬合,，中低濃度部分能夠用直線方程,，中心部分可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù),。免疫檢查時標準點（能夠是倍比稀釋的,，也能夠不是）濃度假設(shè)和相應的吸光度（OD）值假設(shè)能夠出現(xiàn)直線當然是最抱負的了,，這時能夠經(jīng)過EXELL等利便的取得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值,。 

對于標準曲線的擬合辦法，直線,、二次曲線,、三次曲線、指數(shù),、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學反響中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部分,，有的合用于前半段,，有的合用于后半段，有的合用于中心一段,，而Logistic曲線則對曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內(nèi),，Logistic應當都能擬合得較為抱負,。假設(shè)用來定量,，S形曲線的中心段（較陡處）是對比好的,，而兩真?zhèn)€平整部分計算誤差會大，有時乃至會很大,。用于免疫檢查的所謂“標準曲線"真實稱為擬合曲線對比適宜。現(xiàn)在國際上最盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合",，用這種擬合辦法通常能夠?qū)Ρ鹊姆从碀舛群臀舛鹊那€,，從而進一步對比的取得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這么抱負的情況,，標品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線,，這時就不能用直線擬合的辦法了，而對擬合辦法進行挑選即是必要的了,。

樞紐在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,，你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分,。當然,，假設(shè)用于定量，仍是在中心一段較好,。但建模型是一回事,，而用它來定量是另一回事。這些辦法當然沒有一種辦法能夠通用,，但也都能夠用。但并不是說它即是的,。事實上不僅是ELISA,，其它良多生物學反響都是S形曲線，也都能夠用Logistic曲線擬合,。

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