原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子,,可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測定,。SEB是一種細菌毒素,,能夠與抗原呈遞細胞 (APC) 和 TCR上的MHCII類分子結合,誘導促炎細胞因子的釋放,,例如IL-2,、IL-6,、TNF-α和IFN-γ。
應用舉例:誘導活化T細胞
一,、將 PBMCs(120 K/孔)與 Nuclight 綠色試劑標記的 Ramos 細胞(40 /孔)進行共培養(yǎng),。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗體或葡萄球菌腸毒素 B (SEB) 誘導活化,。在 60 h 時,,使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯合 iQue® 3 系統(tǒng)分析 10 µL 樣本,。
每種活化因子會導致不同的 CD3+ T 細胞蛋白表達和殺傷特征:
1.CD3/CD28 Dynabead 誘導的 T 細胞活化呈現濃度依賴的特性,。最高的微球數量對應于最大的活化標志物表達百分比。該結果與高水平的細胞耗竭標志物呈現相關性,。
2.與 Dynabead 和 SEB 相比,,CD3×CD19 BiTE 抗體介導的靶細胞死亡增量最多,活化和耗竭水平顯著降低,。這說明 BiTE 介導的免疫細胞殺傷時間可能持續(xù)的較長,。
3.SEB 刺激,即使在zui低濃度下,,也可使 T 細胞活化并產生最大殺傷率,,導致高水平的 T 細胞耗竭。
原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,,能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子,,可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測定,。SEB是一種細菌毒素,,能夠與抗原呈遞細胞 (APC) 和 TCR上的MHCII類分子結合,誘導促炎細胞因子的釋放,,例如IL-2,、IL-6、TNF-α和IFN-γ,。
二,、使用來自 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒的 Qbeads 測定 Nuclight 綠色標記的 Ramos 和 PBMC(3:1 比例)共培養(yǎng)時細胞因子的釋放數據,。在多個試劑盒中均檢測了 IFN? 和 TNFa 的濃度,,以便將所有試劑盒的測定結果取平均值。
各個活化因子對細胞因子分泌和對表面蛋白表達的影響相當:
1.在使用的微球數量范圍內,,CD3/CD28 Dynabead 誘導的細胞因子釋放呈濃度依賴性增加,。
2.與微球或 SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 刺激后的細胞因子釋放始終較低(最高刺激濃度下的顆粒酶 B 濃度除外),。該結果表明,,在降低毒性風險的情況下(例如細胞因子釋放綜合征),,可以實現高水平的細胞殺傷。
3.SEB 可誘導高水平的細胞因子釋放(即使在低濃度下),。
三,、將 PBMCs(25 K/孔)與貼壁 AU565 細胞(5 K/孔)進行共培養(yǎng)。使用 SEB 誘導 T 細胞活化,。在 60 h 時,,使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯合 iQue® 3 系統(tǒng)提取靶細胞和效應細胞,,進行終點分析,。
SEB 活化誘導靶細胞殺傷呈濃度依賴性增加,伴隨 CD3+ T 細胞上活化(CD69,、CD25 和 HLA-DR)和耗竭(PD-1,、LAG-3 和 TIM-3)標志物的高表達(在所有使用的 SEB 濃度中均是如此)。
其他應用:抗體制備,、毒素檢驗,、多種免疫和偶聯試驗、藥物研發(fā)等,。
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