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一、buffer是干什么的,？

PCR buffer（緩沖液）的作用就是給Taq酶提供一個最適的反應條件,。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分,。不同的pcr buffer成分可能不一樣,。

二、buffer基本組分

1,、Tris-HCl：具有良好的緩沖能力和對多種酶的兼容性,，在PCR中的主要作用是調節(jié)反應體系的pH值，使PCR反應過程維持在一個穩(wěn)定的ph范圍內,；為酶反應提供恒定的酸堿環(huán)境,，保持酶的活性,，確保PCR擴增的順利進行。

2,、K+：主要發(fā)揮穩(wěn)定酶活性和參與模板DNA的解鏈作用,。適當?shù)拟涬x子濃度可以維持Taq酶的活性，從而提高PCR反應的效率,；結合到DNA鏈上的磷酸基團上,，中和負電荷，減弱雙鏈復性時的負電荷相斥,，穩(wěn)定引物-模板復合體,。

3、NH4+：NH4+以銨離子和氨的形式存在,，可以與堿基之間的氫鍵發(fā)生相互作用,，使錯配堿基間的不穩(wěn)定的氫鍵容易斷開，在退火時促進引物的特異性結合,。

4,、Mg2+：和dNTP結合成復合物，作為聚合酶的底物,，是聚合酶的激活劑,；結合到DNA鏈上的磷酸基團上，中和負電荷,，減弱雙鏈復性時的負電荷相斥,，穩(wěn)定引物-模板復合體。

三,、注意

對于 Taq DNA聚合酶,，緩沖液的一個常見成分是來自KCl的鉀離子（K+)，其可促進引物的吸附,。有時，也可使用硫酸銨(NH4)2SO4 代替KCl,。銨離子(NH4+)具有去穩(wěn)定作用,，尤其對于錯配引物-模板復合物堿基對之間的弱氫鍵，因此可增強反應特異性,。

Mg2+ 濃度過低會降低聚合酶活性,，導致PCR產(chǎn)物較少或無PCR產(chǎn)物。另一方面,， Mg2+ 濃度過高則會提高引物-模板復合物的穩(wěn)定性,，產(chǎn)生非特異性PCR產(chǎn)物，并增加由dNTP錯誤插入導致的復制錯誤,。由于NH4+ 與Mg2+具有拮抗效應,，因此,，在各種 Mg2+ 濃度下，含有(NH4)2SO4 的緩沖液都表現(xiàn)出更高的引物特異性,。

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