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要復蘇RAW264.7巨噬細胞,，首先需要將含有1 mL細胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中,，然后將其轉移到1 mL新鮮培養(yǎng)基的無菌管中，并ce底混合均勻,。

接下來,，使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液倒掉,，隨后再加入1 mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞,。

將懸液加入含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中（10ml/10 cm皿），并將其放置在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)（37℃,，5% CO2）,。第二天檢查細胞的生長狀態(tài)和密度，以確定是否需要進行傳代操作,。通過這些步驟,，可以有效地復蘇RAW264.7巨噬細胞，并為其后續(xù)培養(yǎng)提供良好的基礎,。

RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟一

【準備工作】

水浴鍋：預熱至37℃,。

培養(yǎng)基：提前復溫至室溫或37℃。

離心機：設置好轉速（通常為1000 rpm）,。

RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟二

【解凍細胞】

取出細胞：從液氮罐中取出凍存管,，觀察管內無液氮的情況下，捏住管蓋,。

水浴解凍：將凍存管迅速浸入37℃的水浴鍋中,，輕輕搖晃，直到細胞融化至米粒大小的冰塊時終止水浴,，整個過程不超過2分鐘,。

RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟三

【離心和重懸】

離心：將解凍后的細胞懸液轉移至離心管,，以1000 rpm離心3分鐘，棄去上清液,。

重懸：加入預熱的培養(yǎng)基,，輕柔重懸細胞。

RAW 264.7細胞的詳細復蘇具體步驟四

【接種和培養(yǎng)】

接種：將重懸后的細胞懸液接種到新的培養(yǎng)瓶中,，輕輕混勻,。

培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

觀察：復蘇24小時后,，觀察細胞的貼壁情況，確保細胞健康生長,。

【注意事項】

快速操作：整個復蘇過程應盡可能在5-10分鐘內完成,，以確保細胞的高存活率。

防護措施：在水浴解凍時,，使用一次性PE手套包住凍存管，避免直接接觸水源,，防止污染,。

細胞狀態(tài)：定期觀察細胞形態(tài)，確保細胞處于健康狀態(tài),。

通過以上步驟,，研究人員可以有效地復蘇RAW 264.7細胞，確保其在后續(xù)實驗中的良好狀態(tài),。

培養(yǎng)基：中科百抗RPMI1640,，DMEM培養(yǎng)基

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