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一,、產(chǎn)品介紹 

【中文名稱】人 γδT 細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒 

【英文名稱】Human γδT cell robust expasion kit 

【編號(hào)】 CT-004 

【包裝規(guī)格】 2L/套

【試劑盒組成】

【預(yù)期用途】

適用于從人新鮮外周血,、濃縮白細(xì)胞來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞以及凍存的單個(gè)核細(xì)胞在體外擴(kuò)增成 γδT 細(xì)胞。

【貯藏條件與有效期】GD-I,，GD-II,，GD-IV 置于 2-8°C 保存,，有效期為 12 個(gè)月；GD-III 置于-20°C 保存,， 有效期為 24 個(gè)月,，置于 2-8°C 保存，有效期則為 3 個(gè)月,，并勿反復(fù)凍融； 生產(chǎn)日期,，有效期至：見(jiàn)標(biāo)簽,。

【產(chǎn)品特性】 γδT 細(xì)胞具有在體內(nèi)快速反應(yīng)的特性，在受到刺激時(shí),，會(huì)先于 αβ-T 細(xì)胞釋放促炎性細(xì)胞因子 （IFN-γ 和 TNF-α 等）,。γδT 細(xì)胞能夠激活 NK 細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞毒作用，與 DC 細(xì)胞互刺激成熟,， APC 細(xì)胞抗原呈遞的功能,，激活 αβ-T 細(xì)胞的免疫效應(yīng)，γδT 細(xì)胞的殺傷作用具有非 MHC 限制性,， 廣泛的殺瘤譜,，已知對(duì)至少十幾種腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。 γδT 細(xì)胞在人外周血含量很少（1-5%）,，本產(chǎn)品能夠?qū)⑼庵苎械膯蝹€(gè)核細(xì)胞大規(guī)模擴(kuò)增成 γδT 細(xì)胞,，具有擴(kuò)增效率高，目的細(xì)胞百分比高的特點(diǎn),，起始單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過(guò) 14 天培養(yǎng),，總細(xì)胞 數(shù)可以擴(kuò)增約 30±10 倍左右，γδT 細(xì)胞其純度可達(dá) 80%左右,，并且全程無(wú)血清培養(yǎng)為基礎(chǔ)和臨床 研究使用 γδT 細(xì)胞提供一個(gè)有力的產(chǎn)品,。

二、操作步驟

1. 第 0 天,，將制備好的單個(gè)核細(xì)胞（MNC）按 1.5-2.0M cells/mL 細(xì)胞密度鋪于 T-75 瓶中,，加 入 GD-IV 培養(yǎng)基 45mL，GD-I 500μL,，GD-II 100 μL,，GD-III 5mL 以及濃度為 100 萬(wàn) IU/mL 的 IL-2 50μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）； 注意：

1）IL-2 使用 1mL GD-IV 培養(yǎng)基溶解（IL-2 溶解后濃度為 100 萬(wàn) IU/mL）,，存于 2-8°C 冰箱,， 存放時(shí)間不超過(guò)兩周。建議將 IL-2 溶解后分裝于無(wú)菌試劑管后保存于-20°C 冰箱,，使用時(shí)溶解 即可,，注意不要反復(fù)凍融,，且不可使用長(zhǎng)期置于 2-8°C 的 IL-2，否則將嚴(yán)重影響本試劑盒的擴(kuò) 增效果,；

2）請(qǐng)勿將 GD-III 從-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中,，GD-III 溶解wan全后，輕輕搖晃瓶 身,，使其溫度與成份均一,，搖晃時(shí)，請(qǐng)小心避免氣泡產(chǎn)生,；

  3）在細(xì)胞鋪加后與第 3 天補(bǔ)液之前的這段時(shí)間內(nèi),，盡可能不要移動(dòng)培養(yǎng)瓶，以免使其受到溫度 變動(dòng),，震蕩等物理因素的干擾,。

2. 第 3 天（3×24h），補(bǔ)加 95ml GD-IV 培養(yǎng)基,，GD-III 5mL,，IL-2 100μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)袋，此時(shí)袋子含 150mL 培養(yǎng)液,； 注意：為使更多的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到培養(yǎng)袋中,，可先將 T-75 瓶中的細(xì)胞吹打均勻，全部轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中,， 再用部分新鮮配制的培養(yǎng)液潤(rùn)洗培養(yǎng)瓶,，并再次轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中，最后補(bǔ)齊培養(yǎng)液即可,；

3. 第 5 天,，往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 150mL GD-IV 培養(yǎng)基，GD-III 7.5mL,，IL-2 150μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）,，此時(shí)袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

4. 第 7 天,，往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 300mL GD-IV 培養(yǎng)基,，剩余的 GD-III，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度 為 1000IU/mL）,，然后分成兩袋,，此時(shí)每個(gè)袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

5. 第 9 天,，分別往培養(yǎng)袋補(bǔ)加 300ml GD-IV 培養(yǎng)基,，IL-2 300μL（即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL）， 此時(shí)袋子含 1100mL 培養(yǎng)液,； 注意：D5-9 為細(xì)胞增殖高峰期,，補(bǔ)液時(shí)注意根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和密度添加培養(yǎng)基以保持細(xì)胞良 好生長(zhǎng)狀態(tài),。

6.第 11 天，分別往每個(gè)培養(yǎng)袋補(bǔ)加 400mL GD-IV 培養(yǎng)基,，IL-400μL（即 IL-2 終濃度 1000IU/mL） 

7.第 13-14 天,，收獲目的細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1）在使用本試劑盒時(shí),，可先將 GD-I 與 GD-II 試劑管低速離心（如 1000g/min 離心 1min 等）,， 確保試劑足量；

2）由于樣本之間的差異性,，在按上述操作說(shuō)明操作時(shí),，可根據(jù)具體細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，調(diào)整補(bǔ)液時(shí) 間,；

  3）在使用本試劑盒時(shí)，由于樣本之間的差異性,，每個(gè)樣本的細(xì)胞長(zhǎng)速與誘導(dǎo)率存在差異,。

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