由于在流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過程中,，熒光抗體對單細(xì)胞懸液的標(biāo)記效果直接影響實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)質(zhì)量,。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素,，例如抗體特異性,、熒光素信號強(qiáng)弱、熒光素標(biāo)記方式,、同型對照等,。那么你知道我們該如何選擇合適的流式抗體嗎？讓我們一起來看看吧,！
流式抗體本身也是抗體,，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性,，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn),。流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過程中,，盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過程,，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi),，建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記,。
一、流式抗體熒光標(biāo)記的選擇
如果實(shí)驗(yàn)中檢測單一指標(biāo)：不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同,。以某儀器為例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5,，通常來說，PEzui強(qiáng),，適用于弱表達(dá)抗原,。FITC強(qiáng)度較弱，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原,，使用范圍比較廣,。用戶需根據(jù)檢測的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。
如果同時(shí)檢測多個(gè)指標(biāo)：確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測多少個(gè)通道，流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素,。各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配,。如實(shí)驗(yàn)者同時(shí)檢測三個(gè)指標(biāo)，可以在下圖中綠色,、黃色和紅色三個(gè)通道中各選一個(gè)適當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記,，F(xiàn)ITC、PE和PE-cy5,。切忌所有指標(biāo)選擇同一個(gè)通道的熒光標(biāo)記,，以防止熒光的重疊和相互干擾，影響最后結(jié)果,。因此,，流式細(xì)胞儀的通道越多，同一份樣本能同時(shí)做的表面/胞內(nèi)標(biāo)志就越多,。常用熒光標(biāo)記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等,。
二、同型對照的選擇：
流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和其他抗體相關(guān)實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)不同的就是需要選擇同型對照,。同型對照,，是用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色，相當(dāng)于實(shí)驗(yàn)的陰性對照,。同型對照選擇與標(biāo)記抗體同種屬來源,，同亞型，同熒光標(biāo)記的抗體,。比如：抗人的CD3的PE標(biāo)記的抗體,，小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE標(biāo)記的小鼠的IgG2a,。
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