外泌體是一種細(xì)胞分泌的微小膜泡,，大小為30~150nm的磷脂雙分子結(jié)構(gòu)，可在細(xì)胞間傳遞物質(zhì)和信號(hào),。它在機(jī)體內(nèi)廣泛存在,，如外周血、腹水,、尿液,、唾液、腦脊液等各種體液中,。那么你知道外泌體提取與純化常見方法有哪些嗎,？讓我們一起來看看吧！
一,、差速離心法
差速離心法是最常見的外泌體分離技術(shù)之一,。這種方法利用外泌體與其他細(xì)胞器的沉降系數(shù)不同，將細(xì)胞,、細(xì)胞碎片以及其他細(xì)胞器等,，通過不同離心速度分離出去，從而得到純凈的外泌體,。
該方法的優(yōu)點(diǎn)在于提取方法簡(jiǎn)單,，提取過程中不會(huì)引入其他的標(biāo)記物，適合大劑量的樣品處理,。
缺點(diǎn)在于操作繁瑣,，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，操作過程中需要超高速離心,，且由于離心力的因素,，可能會(huì)導(dǎo)致外泌體結(jié)構(gòu)破壞從而對(duì)下游實(shí)驗(yàn)造成影響，對(duì)于一些具有高粘度的生物樣品（例如血漿和血清樣本）,，則需要更長的超速離心步驟和更高的離心速度,。
二、密度梯度離心法
該方法將超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合,，利用外泌體1.13g/ml-1.21g/ml的密度范圍,，實(shí)現(xiàn)外泌體與非囊泡顆粒（如蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)/RNA聚集體等）進(jìn)行分離,，從而能夠提取含量低的外泌體,。
2018年Li K等人改良了此方案,，使用碘克沙醇作為新的一種高效介質(zhì)，外泌體回收率更高,、純度更高,，并且結(jié)構(gòu)和功能保持更好。
三,、聚合物沉降法
這種方法是通過高分子的疏水聚合物（如聚乙二醇（PEG））可以改變外泌體溶解性和分散性的特點(diǎn),，使其能夠在比較低的離心力下沉降出來。其原理可能與疏水聚合物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子以及疏水聚合物本身形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān),。
聚合物沉降法的優(yōu)點(diǎn)在于操作起來較為簡(jiǎn)單,，不需要超速離心機(jī)，得到的外泌體數(shù)量較多,，對(duì)外泌體理化性質(zhì)影響較小,。
然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（如脂蛋白等），從而對(duì)下游分析造成一定影響,。
四,、超濾法
這種方法是將溶劑及小分子物質(zhì)過濾到膜的另一側(cè)，而將相對(duì)大分子物質(zhì)截留在超濾膜上,，以達(dá)到分離的目的,。外泌體直徑范圍30～150 nm，利用超濾膜經(jīng)過長時(shí)間的低速離心就可以分離樣本中的外泌體,。
超濾法的優(yōu)點(diǎn)是操作方便,，富集效率比較高，易于搭配其他膜或操作,，并且成本較低,。
缺點(diǎn)在于過膜易損耗變形，導(dǎo)致膜堵塞,，純度較低,，大顆粒蛋白污染嚴(yán)重，并且在洗脫過程中,，附著于膜上的外泌體難以回收,，導(dǎo)致提取損失。
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