在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。那么你知道ELISA檢測時樣本實驗準備步驟都有什么嗎,?讓我們一起來看看吧,!
1. 血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
3. 尿液
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。
5. 培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7。2-7,。4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
6. 組織標本
切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑,, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
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