日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門(mén)新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),，是 20 世紀(jì) 80 年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎,？讓我們一起來(lái)看看吧,！

一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

1. 實(shí)驗(yàn)用具及材料

（1）人的 MyoD1（MYF3)基因探,、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本,；

（2）指甲油、甲酰胺,、氯化鈉,、檸檬酸鈉、氫氧化鈉,、吐溫 20 等,；

（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱,、染色缸,、載玻片、Nikon E-400 熒光顯微鏡,、蓋玻片,、封口膜、200μL移液器,、暗盒等,。

二,、實(shí)驗(yàn)方法及步驟

1. 探針變性

將探針在 75℃恒溫水浴中溫育 5 min，立即置 0℃,，5～10 min，使雙鏈 DNA 探針變性,。

2. 標(biāo)本變性

（1）將制備好的染色體玻片標(biāo)本于 50℃培養(yǎng)箱中烤片 2～3 h,。（經(jīng) Giemsa 染色的標(biāo)本需預(yù)先在固定液中退色后再烤片）。

（2）取出玻片標(biāo)本,，將其浸在 70～75℃的體積分?jǐn)?shù) 70% 甲酰胺/2×SSC 的變性液中變性2～3 min,。

（3）立即按順序?qū)?biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù) 70%、體積分?jǐn)?shù) 90%和體積分?jǐn)?shù) 100%冰乙醇系列脫水,，每次 5 min,，然后空氣干燥。

3. 雜交

將已變性或預(yù)退火的 DNA 探針 10 μL 滴于已變性并脫水的玻片標(biāo)本上,，蓋上 18×18 蓋玻片,，用 Parafilm 封片，置于潮濕暗盒中 37℃雜交過(guò)夜（約 15～17 h）,。由于雜交液較少,，而且雜交溫度較高，持續(xù)時(shí)間又長(zhǎng),，因此為了保持標(biāo)本的濕潤(rùn)狀態(tài),，此過(guò)程在濕盒中進(jìn)行。

4. 洗脫

此步驟有助于除去非特異性結(jié)合的探針,，從而降低本底,。

（1） 雜交次日，將標(biāo)本從 37℃溫箱中取出,，用刀片輕輕將蓋玻片揭掉,。

（2） 將已雜交的玻片標(biāo)本放置于已預(yù)熱 42～50℃的體積分?jǐn)?shù) 50%甲酰胺/2×SSC 中洗滌3 次，每次 5 min,。

（3） 在已預(yù)熱 42～50℃的 1×SSC 中洗滌 3 次,，每次 5 min。

（4） 在室溫下,，將玻片標(biāo)本于 2×SSC 中輕洗一下,。

（5） 取出玻片，自然干燥,。

（6） 取 200 μL 復(fù)染溶液（PI/antifade 或 DAPI/antifade 染液）滴加在玻片標(biāo)本上,，蓋上蓋玻片。

5. 雜交信號(hào)的放大（適用于使用生物素標(biāo)記的探針）

（1） 在玻片的雜交部位加 150 μL 封閉液 I,，用保鮮膜覆蓋,，37℃溫育 20min,。

（2） 去掉保鮮膜，再加 150 μL avidin-FITC 于標(biāo)本上,，用保鮮膜覆蓋,，37℃繼續(xù)溫育 40 min。

（3） 取出標(biāo)本,，將其放入已預(yù)熱 42～50℃的洗脫液中洗滌 3 次,，每次 5 min。

（4） 在玻片標(biāo)本的雜交部位加 150 μL 封閉液 II,，覆蓋保鮮膜,，37℃溫育 20 min。

（5） 去掉保鮮膜,，加 150 μL antiavidin 于標(biāo)本上,，覆蓋新的保鮮膜，37℃溫育 40 min,。

（6） 取出標(biāo)本,，將其放入已預(yù)熱 42～50℃的新洗脫液中，洗滌 3 次,，每次 5 min,。

（7） 重復(fù)步驟（1）、（2）,、（3）,，再于 2×SSC 中室溫清洗一下。

（8） 取出玻片,，自然干燥,。

（9） 取 200 μL PI/antifade 染液滴加在玻片標(biāo)本上，蓋上蓋玻片,。

6. 封片

可采用不同類(lèi)型的封片液,。如果封片液中不含有 Mowiol（可使封片液產(chǎn)生自封閉作用），為防止蓋片與載片之間的溶液揮發(fā),，可使用指甲油將蓋片周?chē)忾],。封好的玻片標(biāo)本可以在-20～-70℃的冰箱中的暗盒中保持?jǐn)?shù)月之久。

7. 熒光顯微鏡觀察 FISH 結(jié)果

先在可見(jiàn)光源下找到具有細(xì)胞分裂相的視野,，然后打開(kāi)熒光激發(fā)光源,，FITC 的激發(fā)波長(zhǎng)為490 nm。細(xì)胞被 PI 染成紅色,，而經(jīng) FITC 標(biāo)記的探針?biāo)诘奈恢冒l(fā)出綠色熒光,。

更多有關(guān)熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟，請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司：