你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎?讓我們一起來看看吧,!
一,、細(xì)胞計(jì)數(shù)
將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù);500g離心4min,去上清,。
二,、制備單細(xì)胞懸液
將收集的細(xì)胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,,去上清,,重復(fù)2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL,,分配到96孔板中,,每孔100μl細(xì)胞懸液,400g離心5min去上清,。
三,、固定
每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞,2-8°孵育20min,。
四,、洗滌
400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,,重復(fù)兩遍。
每孔加入100μl細(xì)胞通透劑重懸細(xì)胞,,室溫孵育20min,。
400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,,重復(fù)兩遍。
五,、阻斷Fc受體
10-20min,。
六、一抗孵育
每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,,2-8℃反應(yīng)30min,。
七、洗滌
400g離心5min,,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,重復(fù)兩遍,。
八,、二抗孵育
對(duì)于非熒光染料直標(biāo)抗體,加入100μl熒光二抗重懸,,避光2-8℃反應(yīng)30min,。對(duì)于直標(biāo)抗體直接跳到步驟九,。
九、洗滌
400g離心5min,,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,重復(fù)兩遍,。
十,、上機(jī)分析
用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞,4℃保存,,上機(jī)分析,。
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