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細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么,?

閱讀:804      發(fā)布時(shí)間:2023-10-20
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你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎?讓我們一起來看看吧,!

一,、細(xì)胞計(jì)數(shù)

將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù);500g離心4min,去上清,。

二,、制備單細(xì)胞懸液

將收集的細(xì)胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸,400g離心3min,,去上清,,重復(fù)2次;用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL,,分配到96孔板中,,每孔100μl細(xì)胞懸液,400g離心5min去上清,。

三,、固定

每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞,2-8°孵育20min,。

四,、洗滌

400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,,重復(fù)兩遍。

每孔加入100μl細(xì)胞通透劑重懸細(xì)胞,,室溫孵育20min,。

400g離心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,,重復(fù)兩遍。

五,、阻斷Fc受體

10-20min,。

六、一抗孵育

每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl,,2-8℃反應(yīng)30min,。

七、洗滌

400g離心5min,,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,重復(fù)兩遍,。

八,、二抗孵育

對(duì)于非熒光染料直標(biāo)抗體,加入100μl熒光二抗重懸,,避光2-8℃反應(yīng)30min,。對(duì)于直標(biāo)抗體直接跳到步驟九,。

九、洗滌

400g離心5min,,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸,,離心去上清,重復(fù)兩遍,。

十,、上機(jī)分析

200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞,4℃保存,,上機(jī)分析,。

更多有關(guān)細(xì)胞胞內(nèi)染色的操作流程,請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司:


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