免疫細胞化學 (ICC) 是一種使用熒光抗體或染料來檢測細胞內靶抗原的技術,。那么你知道免疫細胞（ICC）實驗步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧,！
一,、細胞培養(yǎng)/固定
很多抗原在離體組織中只存在很短時間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進一步降解，組織形態(tài)和結構被破壞,。樣品浸泡在合適的固定液中,，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性,，并且使組織被保存,、穩(wěn)定在接近 in vivo 狀態(tài)。
二,、通透處理
通透即為對細胞膜進行打孔處理,，使抗體能進入到細胞中和抗原發(fā)生結合。通常,，當抗體檢測細胞內蛋白時（包括抗原表位在胞內段的跨膜蛋白）,，需要對細胞進行通透，一般將細胞樣品在含 0.1-0.25% Triton X-100的PBS中孵育5-10分鐘,。
三,、封閉
對樣本進行封閉，同樣是為了阻斷抗體抗原之間的非特異結合,，降低背景和潛在假陽性染色,。
四、一抗孵育
ICC 實驗的成功也依賴于靶標抗原特異性結合的一抗,。
五,、二抗孵育
對于間接檢測，二抗是成功顯示一抗分布的關鍵,。使用二抗和相關檢測系統(tǒng)能夠擴增信號,，因為不止一個二抗分子與單個一抗結合。
化學顯色與熒光檢測：您可以選擇化學顯色法,，使用酶標記的二抗,，也可以選擇熒光法（免疫熒光），使用熒光染料標記的二抗進行檢測,。
六,、封片觀察
顯色完成后,，通常會對細胞進行復染,，復染劑對特定的細胞結構進行染色，增加染色對比效果,，明確細胞或亞細胞定位,。
復染試劑的選擇取決于您對樣品的染色方式：顯色劑（一種在標準光學顯微鏡下可見的染料）或熒光染色。
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