聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物中通常會(huì)含有過(guò)量的引物,、dNTP、酶等,，這些會(huì)對(duì)后續(xù)核酸序列測(cè)定,、酶切、載體構(gòu)建等產(chǎn)生影響,，通過(guò)PCR純化回收可獲取純的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物,。那么PCR純化回收的步驟與注意事項(xiàng)有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧,！
一,、步驟
1.在紫外投射儀或凝膠成像儀上，用刀片切取包含目的條帶的瓊脂糖凝膠并稱重,；
2.一般以0.1g膠加入100μl溶膠液的比例（具體根據(jù)試劑盒說(shuō)明添加）,，按凝膠實(shí)際重量加入溶膠液，水浴鍋中55℃溶膠（期間可緩慢震動(dòng)Ep管,，將膠溶解wan全）,；
3.回收試劑盒中會(huì)配有回收柱和廢液管，將溶解好的溶液加入回收柱中,，并將回收柱套入2ml廢液管中,；
4.12000r/min離心30-60s，去除廢液,；
5.將500μl漂洗液加入回收柱,，并將回收柱重新套入2ml廢液管中，12000r/min離心60-90s,，去除廢液,；
6.重復(fù)漂洗一次去除廢液；
7.12000r/min離心2min,，將回收柱套入高壓滅菌后的1.5mlEp管中,；
8.向回收柱正中央的濾膜上滴加20-30μl洗脫buffer或高壓滅菌ddH2O，靜置5-15min,；
9.12000r/min離心90-120s,；
10.將1.5mlEp管中的回收產(chǎn)物再次滴入到回收柱中央的濾膜上，或向?yàn)V膜中央再加10μl洗脫buffer或高壓滅菌ddH2O,，繼續(xù)靜置5-15min,；
11.12000r/min離心120s，1.5mlEp管中收集到的溶液即為純化回收的PCR產(chǎn)物,。
二,、注意事項(xiàng)
1. 切取的包含目的條帶的瓊脂糖凝膠需稱重，并按照試劑盒說(shuō)明要求按比例添加溶膠液,；
2. 溶膠需充分,；
3. 回收管,、ddH2O要提前高壓滅菌；
4. 為盡量提高回收率可以將回收產(chǎn)物再次過(guò)柱,、離心,。
更多有關(guān)PCR純化回收的步驟與注意事項(xiàng)，請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司：
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
4
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)