你知道免疫組化實(shí)驗(yàn)流程有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧,！
一,、樣品制備
1. 組織固定：根據(jù)要求收集人或動(dòng)物的組織用于IHC分析，沖洗并用固定劑（一般用甲醛）進(jìn)行固定
2. 組織包埋：將經(jīng)甲醛固定的組織嵌入石蠟,，以長(zhǎng)期保持其天然形狀和組織結(jié)構(gòu)
3. 切片安裝：將組織樣品在切片機(jī)上切片,，并轉(zhuǎn)移至載玻片上干燥保持其形態(tài)
4. 脫蠟水化：因切片上的石蠟會(huì)妨礙染色，所以需將切片上的石蠟溶出,，并水化,。脫蠟或水化不全容易造成非特異性背景著色（一般的脫蠟水化步驟是：將切片依次浸入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-無(wú)水乙醇5min-95%無(wú)水乙醇5min-90%無(wú)水乙醇5min-80%無(wú)水乙醇5min-70%無(wú)水乙醇5min-50%無(wú)水乙醇5min-蒸餾水5min×3，進(jìn)行脫蠟水化）,。
5. 抗原修復(fù)：由于組織在甲醛固定過(guò)程中,，蛋白之間發(fā)生了交聯(lián)及醛基的封閉從而掩蓋抗原決定簇?？梢酝ㄟ^(guò)高壓加熱修復(fù)抗原,，使細(xì)胞內(nèi)抗原決定族暴露，從而提高抗原檢測(cè)率,。
6. 非特定位點(diǎn)封閉：為了防止一抗的非特異性結(jié)合造成假陽(yáng)性,，可以選用BSA、羊血清等封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),。封閉血清來(lái)源一般與二抗保持一致,，室溫封閉10-30min。
二,、樣品染色
1. 一抗,、二抗孵育：抗體孵育時(shí)間,、溫度及濃度等因素對(duì)染色結(jié)果都存在很大影響。在4℃下反應(yīng)緩慢,，背景較淺,；37℃反應(yīng)較快時(shí)間較短；而室溫介于兩者之間,，選擇室溫有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,。二抗一般室溫孵育30min。
2. 底物顯色：基于與酶綴合的二抗,，抗原通過(guò)生色或熒光方式直接檢測(cè),。
3. 復(fù)染封片：組化染色后進(jìn)行復(fù)染可以襯托出組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，常用的復(fù)染劑有蘇木精,、曙紅,、甲基綠、DAPI和Hoechst熒光染色,。觀察結(jié)束后使用中性樹(shù)膠進(jìn)行封片,，可以長(zhǎng)久保存。
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