在做 Western blot 實驗時,你一定會遇到各式各樣的條帶,,最常見的就是條帶跑歪了,,如凹型條帶、凸型條帶,、斜條帶,、條帶拖尾等。如何更好的做好WB實驗,,讓我們一起來看看WB實驗中條帶不跑歪的秘訣吧,!
一、凹凸條帶的原因和解決辦法
可能原因:可能是由于膠未配好(凝膠未能wan全聚合,,膠中有顆?;驓馀荩z未冷卻好,,),,也可能是電壓過高。
解決方法:正確添加質(zhì)量合格且未過期的 AP 及 TEMED,;過濾配膠的試劑保證配膠過程中膠內(nèi)無氣泡,;凝膠冷卻好后再上樣;降低電壓,。
二,、條帶出現(xiàn)黑點或黑斑的原因和解決辦法
可能原因:試劑污染,抗體結合到封閉劑,。
解決方法:使用新鮮配置的試劑,;過濾封閉液;選用其他類型封閉液,。
三,、條帶中出現(xiàn)邊緣規(guī)則的白圈的原因和解決辦法
可能原因:轉膜時膜和膠中間有氣泡,或抗體在膜上未均勻分散,。
解決方法:制備轉膜凝膠時用玻棒趕去氣泡,;使用搖床孵育抗體。
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