polyplus轉染試劑INTERFERin®在1nM siRNA下已經提供了非常高的沉默效率,,并且可以用于多種粘附細胞和懸浮細胞。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應,,其溫和的作用模式確保了更可靠的數據和優(yōu)異的細胞活力,。由于與血清和抗生素的兼容性,INTERFERin®易于使用,,也非常適合轉染miRNA和其他寡核苷酸,,如pre-miRNA、mimic miRNA等,。
polyplus轉染試劑INTERFERin®應用方向廣泛,,主要在以下幾個方面:
一、RNA干擾機制研究
RNA干擾是由細胞質中的RNA分子介導的,,也稱為siRNA,,意思是“小干擾RNA"。這些siRNA寡核苷酸長21至25個堿基對,,其序列與信使RNA(mRNA)特異性互補,。siRNA募集RISC復合物(“RNA誘導的沉默復合物")與其靶mRNA結合,以切割其,,從而導致蛋白質表達的沉默(圖1),。
圖1:細胞中的RNA沉默機制。
二,、基因沉默實驗在進行動手實驗之前,,siRNA必須根據研究目標進行設計,并由專門的供應商合成,。然后是siRNA轉染步驟本身,,然后是基因沉
默和/或表型測定的測量。
將siRNA引入細胞會產生一些副作用,。這些脫靶效應是通過識別誘導翻譯抑制和/或mRNA降解的3'UTR序列產生的,,或者通過識
別靶基因以外的mRNA產生的,這兩者都會導致細胞中的非特異性沉默,。
為了避免脫靶效應,,siRNA必須設計有幾種算法,以確保精確調整靶向。此外,,可以通過使用盡可能低的siRNA濃度來避免非特
異性相互作用,。
在分析結果時,確保知道感興趣的蛋白質和mRNA的半衰期,,并在轉染后24至96小時測量相應的基因沉默,。理想情況下,基因
沉默應該在mRNA和蛋白質水平上進行評估,。
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