polyplus轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin®在1nM siRNA下已經(jīng)提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多種粘附細胞和懸浮細胞,。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng),，其溫和的作用模式確保了更可靠的數(shù)據(jù)和優(yōu)異的細胞活力。由于與血清和抗生素的兼容性,，INTERFERin®易于使用,，也非常適合轉(zhuǎn)染miRNA和其他寡核苷酸,，如pre-miRNA、mimic miRNA等,。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
一,、更少的siRNA,，更少的脫靶效應(yīng)
一些出版物表明,，轉(zhuǎn)染低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)。事實上,，當以高濃度轉(zhuǎn)染siRNA時,，可以觀察到這些不想要的非特異
性副作用。因此,，可以通過使用盡可能少的siRNA來提高實驗數(shù)據(jù)的可靠性,。這就是為什么INTERFERin®被專門設(shè)計為使用
低siRNA濃度提供高沉默效率的原因。
INTERFERin®介導的1 nM特異性siRNA的遞送顯示出對基因表達的選擇性和高效敲低,，而競爭對手（L2K）至少需要
10 nM siRNA才能達到50%的沉默效率（圖1）,。
圖1:INTERFERin®只需要1 nM siRNA即可實現(xiàn)有效的基因沉默。根據(jù)制造商的建議,，使用INTERFERin®或競爭對手L2K用抗-Luc siRNA轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達螢火蟲螢光素酶的3LL細胞,。48小時后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達。對照siRNA未觀察到抑制作用,。
令人驚訝的是,，在10pM的siRNA下仍然實現(xiàn)了50%的沉默（圖2）。
圖2：即使在極低的siRNA濃度下,，INTERFERin®也是高效的,。A549-GL3Luc細胞在血清存在下使用INTERFERin®轉(zhuǎn)染，并降低抗-Luc siRNA的濃度,。48小時后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達,。對照siRNA未觀察到抑制作用。
用INTERFERin®轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的1nM siRNA可將層粘連蛋白基因表達顯著降低至幾乎無法檢測的水平（圖3）,。
圖3：用INTERFERin®轉(zhuǎn)染1nM siRNA導致有效和特異的基因沉默,。使用INTERFERin®用1nM層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染CaSki細胞。48小時后,，通過免疫熒光顯微鏡測定層粘連蛋白A/C沉默效率,。
二、適用于miRNA轉(zhuǎn)染microRNA（miRNA）寡核苷酸的轉(zhuǎn)染越來越多地被用于分析特定miRNA對細胞功能的生物學影響,。INTERFERin®是遞送
miRNA,、miRNA模擬物或前miRNA的首xuan試劑。
INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑,，特別設(shè)計用于在多種細胞中實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率,，從而實現(xiàn)高基因沉默或刺激
基因表達,。事實上，一些miRNA也已知通過與感興趣基因的啟動子結(jié)合來誘導基因表達,。例如,，INTERFERin®介導的miR-373
的遞送導致E-鈣粘蛋白表達增加3倍（圖4）。
圖4：用INTERFERin®轉(zhuǎn)染miR-373增強E-鈣粘蛋白的表達,。將PC-3細胞接種在6孔板中,，并用miR-373（25 nM）轉(zhuǎn)染，每孔使用8µl的INTERFERin®,。轉(zhuǎn)染后72小時,，通過RT-qPCR測定E-鈣粘蛋白mRNA的表達水平。用HPRT-1基因表達對測定進行標準化,。
INTERFERin®的陽離子組分只需要很少的寡核苷酸量,，從而實現(xiàn)溫和的轉(zhuǎn)染過程。此外,，簡單而穩(wěn)健的協(xié)議確保了可重復的結(jié)果,。像miRNA這樣的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin®轉(zhuǎn)染，從而導致強烈的基因沉默或刺激基因表達,。無論使用何種濃度的INTERFERin®,，效果都大致相同，使INTERFERin®成為一種經(jīng)濟的試劑,。例如,，使用不同體積的INTERFERin®的折疊變化始終在1.5和1.8之間（圖5）。
圖5:INTERFERin®在非常低的量下已經(jīng)很有效,。將PC-3細胞接種在6孔板中,，并使用4、6或8µl/孔的INTERFERin®用miR-373（10nM）轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染后72小時,，通過Western印跡分析E-鈣粘蛋白的表達。使用β-肌動蛋白表達對測定進行標準化,。以對照情況為參考來表示量化,。
與高細胞活力相關(guān)的高轉(zhuǎn)染效率使INTERFERin®成為為科學出版物生成相關(guān)數(shù)據(jù)的首xuan試劑。事實上,，自推出以來,，使用INTERFERin®研究miRNA和miRNA相關(guān)分子的出版物數(shù)量呈指數(shù)級增長（圖6）。
圖6:INTERFERin®參與了越來越多關(guān)于miRNA轉(zhuǎn)染的出版物,。
三,、超過90%的基因沉默
對于許多貼壁細胞系或原代細胞，1nM的siRNA足以獲得90%以上的基因沉默,。對于懸浮細胞系,，使用5nM siRNA的INTERFERin®仍然可以達到80%的沉默（表1）,。
表1：用INTERFERin®成功轉(zhuǎn)染的細胞系和獲得的沉默效率。
四,、卓yue的細胞活力
在細胞活力方面,，INTERFERin®優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑。用1nM siRNA轉(zhuǎn)染48小時后,，用INTERFERin®轉(zhuǎn)染的細胞看起來是健康的,，而用試劑可以清楚地觀察到毒性（圖7）。
圖7:INTERFERin®對細胞極為溫和,，如使用INTERFERin®或競爭試劑轉(zhuǎn)染siRNA 48小時后細胞形態(tài)的比較所示,。A549-GL3Luc細胞在血清存在下，使用INTERFERin®或競爭對手S或H,，根據(jù)制造商的方案，用1nM螢光素酶siRNA轉(zhuǎn)染,。
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