l 血清
血清是生長和附著因子,、礦物質(zhì),、脂質(zhì)和激素的來源,是細(xì)胞培養(yǎng)的重要組分,。血清能調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的通透性,,同時能作為載體攜帶酶、脂質(zhì),、酶和微量元素等進入細(xì)胞,。
l 血清使用的常見問題
Q1. 收到的血清有部分解凍的現(xiàn)象,影響后續(xù)使用嗎,?
正常情況下,,血清應(yīng)冷凍送達。但是如果血清有部分解凍,,仍可繼續(xù)使用,。血清在解凍后,根據(jù)實驗需求分裝成單次用量后再進行儲存以供后續(xù)使用,。
Q2. 血清需要避光保存嗎,?
正常情況下,,在室內(nèi)或?qū)嶒炇覠艄獾恼彰飨拢挥绊懷宓氖褂?。但不建議將血清暴露在波長短或強度高的光下,,因為血清中含有一些對光敏感的成分。
Q3. 血清必須熱滅活嗎,?
熱滅活可以破壞血清中補體的活性,。哺乳動物血清中存在的補體蛋白參與細(xì)胞的溶解,收縮平滑肌,,刺激細(xì)胞和血小板釋放組胺,,并激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。有研究比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細(xì)胞株的生長能力影響(如下圖所示),,發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中,,熱滅活對6株細(xì)胞有負(fù)面影響(紅框)、3株無影響(綠框),、2株有微弱正面改善(黃框),,因此在多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清不需要熱滅活,熱滅活對細(xì)胞生長沒有明顯的促進作用,,反而還會影響血清質(zhì)量,,使細(xì)胞的生長速率降低。因此如果不是非必須,,可不必做血清熱滅活這一處理,。
圖1 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況
Q4. 培養(yǎng)哪些細(xì)胞需要熱滅活血清?
培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞(ESC),、平滑肌細(xì)胞,、免疫細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞時,建議使用熱滅活血清,。
Q5. 血清如何熱滅活,?
有研究表明,熱滅活時若水浴溫度過高或加熱時間過長,,都會降低血清的性能,,從而影響細(xì)胞生長(如下圖2和3所示)。因此建議將血清加熱至56 °C,,持續(xù)30分鐘進行熱滅活,。
圖2 使用不同溫度熱滅活血清對細(xì)胞生長的影響
圖3 使用不同時間熱滅活血清對細(xì)胞生長的影響
注意:滅活時,若使用水浴槽,,請保持水面與血清液面等高,。滅活后,建議使用冷水浴降溫。
Q6. 什么是γ-輻照血清,?
γ-輻照是將血清暴露于25-35 kGy劑量的鈷-60源,,使病毒和支原體等其他微生物菌體失活。γ-輻照不會降低血清的理化特性或細(xì)胞培養(yǎng)性能,。
Q7. FBS的顏色與之前的批次不一樣,。這會影響血清性能嗎?
血清中含有微量的血紅蛋白,,血清的顏色取決于血紅蛋白濃度,顏色的深淺和血清的性能無關(guān),。
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