Elastin 彈性蛋白/膠原酶是廣泛應(yīng)用的消化劑，胰蛋白酶是一種胰臟制品,對蛋白質(zhì)有水介作用,主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開,在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同,對細(xì)胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對細(xì)胞的作用,取決于細(xì)胞類型,、酶的活力,、配制的濃度、消化的溫度,、無機鹽離子,、pH以及消化時間的長短等。
是一種從細(xì)菌中提取出來的酶,對膠原有很強的消化作用,，適于消化纖維性組織,、上皮組織以及癌組織,它對細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害,，該酶分離效果好,即使有鈣,、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡便又可提高細(xì)胞成活率,濃度200u/mL或0，0,，3mg/mL,，此酶消化作用緩和,無需機械振蕩,但膠原酶價格較高,大量使用將增加實驗成本。
Elastin 彈性蛋白/膠原酶的具體操作方法如下：
?、僭诩魯噙B接嬰兒端和母親的臍帶后,，立刻用臍帶夾夾住,，防止內(nèi)部污染。裝入無菌袋(容器)中,，送進實驗室,。
②在生物安全柜或超凈工作臺內(nèi),，取出臍帶,，連同臍帶夾用75%的酒精泡2min(50ml離心管或250px皿)。如果臍帶較長,，無法裝入容器,，可以把臍帶剪成250px左右，但是剪斷之前一定要用臍帶夾加好,，防止酒精進入臍帶內(nèi)部,，損傷細(xì)胞。
?、塾镁凭幚硗?，迅速移入裝有PBS或生理鹽水的容器中浸泡清洗2次，每次2min即可,。
?、芗舻裟殠A，把臍帶剪成2-75px段,，用剪刀從臍靜脈內(nèi)側(cè)剖開臍帶,，用帶齒鑷子(臍帶組織比較滑，用帶齒鑷子好操作)把臍靜脈,、臍動脈以及臍帶包膜去除,，防止雜細(xì)胞混入。
?、萦眉舻都羲槟殠ЫM織,，0，1%Ⅱ型膠原酶(稀釋液用DMEM/F12)過夜消化,，4℃過夜消化,。
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