Elastin 彈性蛋白/膠原酶是廣泛應(yīng)用的消化劑,，胰蛋白酶是一種胰臟制品,對(duì)蛋白質(zhì)有水介作用,主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開,在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同,對(duì)細(xì)胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的作用,取決于細(xì)胞類型、酶的活力,、配制的濃度,、消化的溫度、無(wú)機(jī)鹽離子,、pH以及消化時(shí)間的長(zhǎng)短等,。
是一種從細(xì)菌中提取出來(lái)的酶,對(duì)膠原有很強(qiáng)的消化作用,，適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對(duì)細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害,，該酶分離效果好,即使有鈣,、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡(jiǎn)便又可提高細(xì)胞成活率,濃度200u/mL或0，0,，3mg/mL，此酶消化作用緩和,無(wú)需機(jī)械振蕩,但膠原酶價(jià)格較高,大量使用將增加實(shí)驗(yàn)成本,。
Elastin 彈性蛋白/膠原酶的具體操作方法如下：
?、僭诩魯噙B接?jì)雰憾撕湍赣H的臍帶后，立刻用臍帶夾夾住,，防止內(nèi)部污染,。裝入無(wú)菌袋(容器)中，送進(jìn)實(shí)驗(yàn)室,。
?、谠谏锇踩窕虺瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)，取出臍帶,，連同臍帶夾用75%的酒精泡2min(50ml離心管或250px皿),。如果臍帶較長(zhǎng)，無(wú)法裝入容器,，可以把臍帶剪成250px左右,，但是剪斷之前一定要用臍帶夾加好，防止酒精進(jìn)入臍帶內(nèi)部,，損傷細(xì)胞,。
③用酒精處理完,，迅速移入裝有PBS或生理鹽水的容器中浸泡清洗2次,，每次2min即可。
?、芗舻裟殠A,，把臍帶剪成2-75px段，用剪刀從臍靜脈內(nèi)側(cè)剖開臍帶,，用帶齒鑷子(臍帶組織比較滑,，用帶齒鑷子好操作)把臍靜脈、臍動(dòng)脈以及臍帶包膜去除,，防止雜細(xì)胞混入,。
⑤用剪刀剪碎臍帶組織,，0,，1%Ⅱ型膠原酶(稀釋液用DMEM/F12)過(guò)夜消化,，4℃過(guò)夜消化。
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