近期實驗室的大家都不約而同地拼搏在ELISA前線,ELISA好做么?ELISA是不是什么蛋白都能檢測?那能不能不跑WB了?面對這一番提問,，突然覺得是時候整理一下關(guān)于ELISA的實驗技能,，以備大家不時之需!

首先ELISA是什么，相信只要本科醫(yī)學(xué)的小伙伴們,，就算不知道ELISA是干嘛的，也能答出來抗原抗體反應(yīng),，ELISA就是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。

一、那么接著一個重要的問題就是，ELISA和WB如何選擇

相信這個問題肯定很多人考慮過,，其實我們選擇的時候只要明白兩個實驗的優(yōu)缺點就行,。

首先，ELISA抗原抗體都能檢測,，而WB主要檢測的就是抗原,。對于ELISA主要的特點就是,，使用的抗原或抗體是與某種酶連接成的酶標(biāo)抗原或抗體，由于酶的催化效率很高,，可以放大反應(yīng)效果,，增大檢測的靈敏度，因此ELISA的檢測限可以達(dá)到ng級,，但WB顯色敏感度一般在pg級。同時ELISA在保證實驗穩(wěn)定有效的前提下,，是一個很好的定量實驗,。對于我們熟悉的WB實驗，也有一個非常鮮明的優(yōu)點就是,，可以將不同大小的蛋白進(jìn)行分離,，根據(jù)目的蛋白的分子量大小預(yù)測位置進(jìn)行檢測，這樣我們不僅能夠知道檢測的蛋白是否是多聚體,、降解產(chǎn)物等，也能夠同時檢測不止一個目的蛋白,。

同時我們也應(yīng)該從樣本和目的蛋白種類進(jìn)行考慮，如果需要檢測的目的蛋白是血漿或血清中的分泌蛋白,，那么ELISA可能更適合

二,、ELISA實驗過程中需要注意什么?

1.操作過程需牢記

首先,，實驗進(jìn)行前要先將試劑盒從冰箱中 恢復(fù)室溫 ,。加樣時盡量將液體加入孔底,，不要有氣泡， 提供一個小 tip! 因為有氣泡會影響吸光度值的測定,，檢測之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡,。洗板時注意不要間隔太久，盡量 避免干板現(xiàn)象!按照試劑盒批號和保質(zhì)期使用,，不同批次的試劑嚴(yán)禁混合使用,，同時試劑盒使用后 剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存 ，防止潮濕,。目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當(dāng)延長孵育時間,，使其充分結(jié)合。 (嚴(yán)格按照說明時間進(jìn)行,，防止非特異性結(jié)合,，因此小伙伴們還是要多咨詢一下客服! )

三,、ELISA數(shù)據(jù)如何處理

首先我們都知道要做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,，那么ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線是需要我們擬合曲線得到的，有很多軟件都是可以直接幫助我們合成曲線并進(jìn)行樣本含量計算的，這里推薦大家?guī)讉€良心好用的軟件，ELISACalc,、origin、Curve Exert,、ReaderFit等等。

最后，Elisa并不是簡單的加樣和檢測，實驗方法的選擇也不是圖省事，希望小伙伴們都輕松掌握,，快樂實驗，快樂發(fā)paper!