Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)常見問題分析

　　1、ELISA試劑盒試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果,，常見有7種原因,，其解決方法如下：

　　1)可能原因：溫育的時(shí)間或者溫度不夠；

　　解決方法：校正溫育箱溫度,。

　　2)可能原因：顯色反應(yīng)時(shí)間太短,；

　　解決方法：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。

　　3)可能原因：所用配制緩沖液的蒸餾水有問題,；

　　解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水,。

　　4)可能原因：加入/酶的稀釋液濃度太低,；

　　解決方法：按照說明書保存試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器,，吸嘴要配套,，裝吸嘴時(shí)要緊密。

　　5)可能原因：酶標(biāo)儀濾光片不正確,；

　　解決方法：檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片,。

　　6)可能原因：試劑盒沒有充分平衡；

　　解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘,，確保所有試劑已平衡至室溫,。

　　7)可能原因：不正確的試劑儲(chǔ)存方式；

　　解決方法：按照說明書要求保存試劑盒,。

　2,、ELisa試劑盒試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定的重復(fù)性差，這是什么原因造成的,？

　　答：試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定的重復(fù)性差，這是典型的由測(cè)定操作引起的問題,，常見原因如下：

　　a)可能原因：加樣本及試劑量不準(zhǔn),；孔間不一致；

　　解決方法：校正移液器,，吸嘴要配套,，裝吸嘴時(shí)要緊密。

　　重復(fù)某一樣品時(shí),，加樣時(shí)間盡可能與次接近,；

　　重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件,、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,，以排除這些因素造成的不一致的可能性；

　　樣品稀釋前應(yīng)充分混勻,。

　　b)可能原因：加樣過快,，孔間發(fā)生污染；

　　解決方法：重復(fù)測(cè)定標(biāo)本,，操作條件,、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性,；加樣不要過快,。

　　c)可能原因：加錯(cuò)樣本；

　　解決方法：檢查記錄和試劑,，是否加錯(cuò)樣本,。

　　d)可能原因：加樣本及試劑時(shí),，加在孔壁上部非包被區(qū)；

　　解決方法：加樣槍頭不要貼壁,。

　　e)可能原因：不同批號(hào)試劑盒中組分混用,；

　　解決方法：不同批號(hào)試劑盒中組分不可混用。

　　f)可能原因：溫育時(shí)間,、洗板,、顯色時(shí)間不一致；

　　解決方法：檢查時(shí)間是否一致,。

　　g)可能原因：孔內(nèi)污染雜物,；

　　解決方法：離心樣品，排除雜物,。

　　h)可能原因：試劑/樣品沒有混勻,；

　　解決方法：充分混勻樣品和試劑。

　　i)可能原因：血清標(biāo)本未*凝固即加入,，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血

　　細(xì)胞,，易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。

　　解決方法：待血清標(biāo)本*凝固后做試驗(yàn),。

　　3,、 試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽性對(duì)照不顯色,，應(yīng)如何分析和查找原因,？

　　答：試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽性對(duì)照不顯色,，常見原因如下：

　　a)可能原因：漏加或者誤加試劑,；

　　解決方法：檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對(duì)標(biāo)簽,。

　　b)可能原因：試劑過期,；

　　解決方法：使用有效期內(nèi)的產(chǎn)品。

　　c)可能原因：洗板液配制中出現(xiàn)問題,，如量筒不干凈含HRP酶抑制物（疊氮鈉

　　等）,；

　　解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑,。

　　d)可能原因：溫育的時(shí)間或溫度不夠,；

　　解決方法：校正溫育箱溫度。

　　e)可能原因：標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失,；

　　解決方法：標(biāo)準(zhǔn)品正確保存,、溶解和混勻。

　　f)可能原因：失活或者丟失,；

　　解決方法：更換或者提高濃度

　　g)可能原因：酶失活或者丟失

　　檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20－100倍,，取5uL加入50ul的顯色底物,，終止后顯色是否能達(dá)到1.0左右，此為酶的粗略估計(jì),。

　　解決方法：更換酶或者提高酶的濃度,。

　　h)可能原因：顯色底物失活

　　檢查方法：加少量的工作濃度的酶，TMB是否很快顯色,。

　　解決辦法：更換顯色底物.

4. Elisa試劑盒試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,，這是什么原因造成的？

　　答：試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,，常見原因如下：

　　a)可能原因：洗板不干凈,；

　　解決方法：充分洗滌，*拍干,；洗板要防止交叉污染,；濃縮洗液準(zhǔn)確配制；吸嘴盡可能一次性使用,；加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,，不要反復(fù)使用，否則易造成污染,。

　　b)可能原因：顯色液變質(zhì)或者試劑過期,；

　　解決方法：檢查試劑盒有效期。

　　c)可能原因：試劑稀釋有誤,，如加酶的濃度過高；

　　解決方法：請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制,；

　　d)可能原因：蒸餾水受酶等污染,；

　　解決方法：使用新鮮蒸餾水；

　　e)可能原因：試劑混用,；

　　解決方法：不同批號(hào)試劑勿混用,。

　　f)可能原因：培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長。

　　解決方法：顯色反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)縮短,。