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經(jīng)常吃的銀耳木耳就有！測測其中的糖含量

關(guān)鍵詞：離子色譜,；食用菌,；巖藻糖；阿糖醇,；海藻糖,；甘露糖；甘露醇,；葡萄糖,；半乳糖；核糖,；方法學(xué),。

前言

食用菌屬于真菌類生物,并含有生物活性物質(zhì),可以在一定程度上提高人體的免疫力,食用菌也有抗癌的作用,其中所含的多糖體可以刺激抗體的形成,從而增強(qiáng)內(nèi)部防御能力,并降低某些物質(zhì)誘發(fā)腫瘤的幾率。

目前市面上出現(xiàn)的食用菌保健品,，無法確定其提取液是食用菌提取出來的,，還是由其他添加劑中提取出來的。所以將樣品中單糖提取出來并水解,，根據(jù)糖的分布不同以此來鑒定不同食用菌,。

皖儀開發(fā)了一種離子色譜測試方法檢測食用菌中的八種糖含量，樣品前處理操作簡單,，測試準(zhǔn)確性高,，重現(xiàn)性好，不同組分間分離度良好,，可以滿足客戶大規(guī)模測試的要求,，并且提高時(shí)效性，測試結(jié)果一致性,，減少人為及系統(tǒng)誤差,。

1.  實(shí)驗(yàn)方法

1.1  測試條件

離子色譜儀IC6300系列

儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器；

色譜柱：糖類專用色譜柱（4.0mm×250mm）,；

保護(hù)柱：糖類專用保護(hù)柱（30 mm×4 mm）,；

柱溫：45℃；

流速：0.4ml/min,；

進(jìn)樣量：25μL,；

檢測器：安培檢測器。

1.2 使用試劑

淋洗液：A：超純水   B：600mM NaOH 

標(biāo)樣：

巖藻糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),；

阿糖醇：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),；

海藻糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

甘露糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),；

葡萄糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

半乳糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

核糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

甘露醇：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

樣品：食用菌

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

單一標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取0.1g（精確至0.1mg）巖藻糖,、阿糖醇,、海藻糖、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖,、核糖標(biāo)準(zhǔn)品,，用0.1％苯甲酸溶液溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶定容至刻度,，配置成濃度為1000mg/L的單一標(biāo)準(zhǔn)儲備液,，貯存在4℃條件下，有效期一個月,。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L):分別移取20.00mL巖藻糖,、阿糖醇、海藻糖,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖,、核糖單一標(biāo)準(zhǔn)儲備液于200mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度。置于0℃~4℃密封,，保存期1個月,。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取0.250mL、0.500mL,、1.00mL,、2.00mL、5.00mL,、10.00mL,、20.00mL和50.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇,、海藻糖,、甘露糖、甘露醇,、葡萄糖,、半乳糖、核糖質(zhì)量濃度為0.25mg/L,、0.50mg/L,、1.00mg/L、2.00mg/L,、5.00mL,、10.00mL,、20.00mg/L和50.00mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用現(xiàn)配,。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取0.250mL、0.500mL,、1.00mL,、2.00mL、5.00mL,、10.00mL,、20.00mL和50.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇,、海藻糖,、甘露糖、甘露醇,、葡萄糖,、半乳糖、核糖的質(zhì)量濃度為0.25mg/L,、0.50mg/L,、1.00mg/L、2.00mg/L,、5.00mL,、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,。臨用現(xiàn)配,。

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列曲線濃度梯度表

2．測試結(jié)果

2.1 巖藻糖、阿糖醇,、海藻糖,、甘露糖、甘露醇,、葡萄糖,、半乳糖、核糖線性測試結(jié)果

依次移取0.25mg/L,、0.50mg/L,、1.00mg/L、2.00mg/L,、5.00mL,、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,，按照1.1工作測試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線線譜圖多點(diǎn)重疊圖如圖1,，果糖,、葡萄糖、蔗糖,、麥芽糖和乳糖在該色譜條件下線性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上,，線性良好。

圖1 食用菌中八種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線重疊色譜圖

表2線性方程

2.2 巖藻糖,、阿糖醇,、海藻糖、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖,、核糖標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

在1.1的工作測試條件下條件下,，標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測。樣品圖譜如圖2,，所示樣品圖譜中的目標(biāo)離子巖藻糖,、阿糖醇、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖峰形對稱,，分離度良好,，最終得到樣品中巖藻糖、阿糖醇,、海藻糖,、甘露糖、甘露醇,、葡萄糖,、半乳糖、核糖的含量,。繡球菌中阿糖醇含量為0.48mg/g,，甘露醇含量為3.525mg/g，巖藻糖含量為13.125mg/g,，甘露糖含量為33.015mg/g,，葡萄糖含量為273.75mg/g，半乳糖含量為29.415mg/g,。

圖2 樣品測試譜圖

2.3 樣品加標(biāo)回收重復(fù)性測試結(jié)果

分別向樣品加5mg/L,、10mg/L、25mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品,，每個濃度3個平行樣品進(jìn)行測定,，其測定譜圖分別如圖3-5所示,，其回收率在95.25％~105.94％。

圖三 樣品中加標(biāo)5mg/L測試譜圖

圖四 樣品加標(biāo)10mg/L測試重疊圖譜

圖五 樣品加標(biāo)25mg/L測試重疊圖譜

2.4 檢出限測試

對0.25mg/L糖類標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢出限測定,，其信噪比在95~505之間,，大于3,圖六為樣品進(jìn)一步稀釋后加標(biāo)測試圖譜。

圖六 0.25mg/L標(biāo)準(zhǔn)品測試圖譜

表三 檢出限與定量限測定表

3. 結(jié)論

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300系列對食用菌中的八種糖進(jìn)行測試,，包含系統(tǒng)適用性,、標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證、重復(fù)性驗(yàn)證,、加標(biāo)回收率。測試結(jié)果峰形較好,，線性良好,，重復(fù)性滿足要求，靈敏度高完全滿足測試要求,。