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離子色譜法檢測(cè)食用菌中的八種糖含量

閱讀:532      發(fā)布時(shí)間:2024-5-31
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經(jīng)常吃的銀耳木耳就有,!測(cè)測(cè)其中的糖含量



關(guān)鍵詞:離子色譜,;食用菌;巖藻糖,;阿糖醇,;海藻糖;甘露糖,;甘露醇,;葡萄糖;半乳糖,;核糖,;方法學(xué)。

 

前言

 

食用菌屬于真菌類生物,并含有生物活性物質(zhì),可以在一定程度上提高人體的免疫力,食用菌也有抗癌的作用,其中所含的多糖體可以刺激抗體的形成,從而增強(qiáng)內(nèi)部防御能力,并降低某些物質(zhì)誘發(fā)腫瘤的幾率,。

目前市面上出現(xiàn)的食用菌保健品,,無(wú)法確定其提取液是食用菌提取出來(lái)的,還是由其他添加劑中提取出來(lái)的,。所以將樣品中單糖提取出來(lái)并水解,,根據(jù)糖的分布不同以此來(lái)鑒定不同食用菌。


皖儀開(kāi)發(fā)了一種離子色譜測(cè)試方法檢測(cè)食用菌中的八種糖含量,,樣品前處理操作簡(jiǎn)單,,測(cè)試準(zhǔn)確性高,重現(xiàn)性好,,不同組分間分離度良好,,可以滿足客戶大規(guī)模測(cè)試的要求,并且提高時(shí)效性,,測(cè)試結(jié)果一致性,,減少人為及系統(tǒng)誤差。

 

1.  實(shí)驗(yàn)方法


1.1  測(cè)試條件

 

1.png

離子色譜儀IC6300系列

 

儀器:IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測(cè)器,;

色譜柱:糖類專用色譜柱(4.0mm×250mm),;

保護(hù)柱:糖類專用保護(hù)柱(30 mm×4 mm);

柱溫:45℃,;

流速:0.4ml/min,;

進(jìn)樣量:25μL

檢測(cè)器:安培檢測(cè)器,。

 

1.2 使用試劑

淋洗液:A:超純水   B600mM NaOH 

標(biāo)樣:

巖藻糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),;

阿糖醇:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),;

海藻糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);

甘露糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),;

葡萄糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

半乳糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

核糖:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

甘露醇:純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

樣品:食用菌

 

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別稱取0.1g(精確至0.1mg)巖藻糖,、阿糖醇、海藻糖,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖,、核糖標(biāo)準(zhǔn)品,用0.1%苯甲酸溶液溶解,,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶定容至刻度,,配置成濃度為1000mg/L的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,貯存在4℃條件下,,有效期一個(gè)月,。

 

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L):分別移取20.00mL巖藻糖、阿糖醇,、海藻糖、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖,、核糖單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于200mL容量瓶中,0.1%苯甲酸溶液定容至刻度,。置于0~4℃密封,保存期1個(gè)月,。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取0.250mL,、0.500mL1.00mL,、2.00mL,、5.00mL10.00mL,、20.00mL50.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L)100mL容量瓶中,0.1%苯甲酸溶液定容至刻度,配得巖藻糖,、阿糖醇、海藻糖,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖,、核糖質(zhì)量濃度為0.25mg/L,、0.50mg/L1.00mg/L,、2.00mg/L,、5.00mL10.00mL,、20.00mg/L50.00mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,。臨用現(xiàn)配。

 

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取0.250mL,、0.500mL,、1.00mL2.00mL,、5.00mL,、10.00mL20.00mL50.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(100mg/L)100mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得巖藻糖,、阿糖醇,、海藻糖、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖,、核糖的質(zhì)量濃度為0.25mg/L,、0.50mg/L1.00mg/L,、2.00mg/L,、5.00mL10.00mL,、20.00mg/L50.00mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,。臨用現(xiàn)配。

 

1 標(biāo)準(zhǔn)系列曲線濃度梯度表

2.png

 

2.測(cè)試結(jié)果

 

2.1 巖藻糖,、阿糖醇,、海藻糖、甘露糖,、甘露醇,、葡萄糖、半乳糖,、核糖線性測(cè)試結(jié)果

 

依次移取0.25mg/L,、0.50mg/L1.00mg/L,、2.00mg/L,、5.00mL,、10.00mL20.00mg/L50.00mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,,按照1.1工作測(cè)試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線線譜圖多點(diǎn)重疊圖如圖1,,果糖、葡萄糖,、蔗糖,、麥芽糖和乳糖在該色譜條件下線性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上,線性良好,。

3.png

1 食用菌中八種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線重疊色譜圖

 

2線性方程

4.png


2.2 巖藻糖,、阿糖醇、海藻糖,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖,、核糖標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

1.1的工作測(cè)試條件下條件下,標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè),。樣品圖譜如圖2,,所示樣品圖譜中的目標(biāo)離子巖藻糖、阿糖醇,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖峰形對(duì)稱,分離度良好,,最終得到樣品中巖藻糖,、阿糖醇、海藻糖,、甘露糖,、甘露醇、葡萄糖,、半乳糖,、核糖的含量。繡球菌中阿糖醇含量為0.48mg/g,,甘露醇含量為3.525mg/g,,巖藻糖含量為13.125mg/g,甘露糖含量為33.015mg/g,,葡萄糖含量為273.75mg/g,,半乳糖含量為29.415mg/g,。

 

5.png

2 樣品測(cè)試譜圖

 

2.3 樣品加標(biāo)回收重復(fù)性測(cè)試結(jié)果

分別向樣品加5mg/L10mg/L,、25mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品,,每個(gè)濃度3個(gè)平行樣品進(jìn)行測(cè)定,其測(cè)定譜圖分別如圖3-5所示,,其回收率在95.25~105.94%,。

6.png

圖三 樣品中加標(biāo)5mg/L測(cè)試譜圖

 

7.png

圖四 樣品加標(biāo)10mg/L測(cè)試重疊圖譜

 

8.png

圖五 樣品加標(biāo)25mg/L測(cè)試重疊圖譜

 

2.4 檢出限測(cè)試

對(duì)0.25mg/L糖類標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢出限測(cè)定,其信噪比在95~505之間,,大于3,圖六為樣品進(jìn)一步稀釋后加標(biāo)測(cè)試圖譜,。

 

9.png

圖六 0.25mg/L標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)試圖譜

 

表三 檢出限與定量限測(cè)定表

10.png

 

3. 結(jié)論

 

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300系列對(duì)食用菌中的八種糖進(jìn)行測(cè)試,包含系統(tǒng)適用性,、標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證,、重復(fù)性驗(yàn)證、加標(biāo)回收率,。測(cè)試結(jié)果峰形較好,,線性良好,重復(fù)性滿足要求,,靈敏度高完全滿足測(cè)試要求,。




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