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皖儀科技離子色譜法測定唾液中的葡萄糖濃度

引言

無創(chuàng)血糖檢測一直備受青睞，人唾液具有生物信息豐富,、采集安全方便等優(yōu)點(diǎn),，是無創(chuàng)血糖檢測的理想媒介。作為血糖標(biāo)志物之一的唾液葡萄糖（唾液糖）因時(shí)效性更強(qiáng)，可反映血糖實(shí)時(shí)信息,，受到廣泛研究,。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的唾液糖均值明顯高于糖代謝正常人群。當(dāng)唾液糖濃度≥20 mg/L時(shí),，唾液糖與血糖水平呈顯著正相關(guān),，且此時(shí)相關(guān)系數(shù)r最大。

T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn),，實(shí)驗(yàn)離子色譜法測定人唾液中的葡萄糖含量,。已于2023年10月10日正式實(shí)施。

皖儀開發(fā)了一種離子色譜測試方法檢測人唾液中的葡萄糖含量,，樣品前處理操作簡單,，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確性高,，完全滿足T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)在對人唾液中葡萄糖的測試要求,。

關(guān)鍵詞：離子色譜；食品,；葡萄糖,；方法學(xué)驗(yàn)證

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1測試條件

皖儀科技IC6300系列離子色譜儀

儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器（Au工作電極）

自動進(jìn)樣器：AS2800/AS3110

色譜柱：糖類專用色譜柱（4.0mm×250mm）；

保護(hù)柱：糖類專用保護(hù)柱（30 mm×4 mm）,；

柱溫：30℃,；

流速：0.45ml/min；

進(jìn)樣量：250μL,；

檢測模式：脈沖積分

1.2 使用試劑

淋洗液：A:超純水 B：100mM NaOH  C:50mM NaOH+125mM CH3COONa

標(biāo)樣：葡萄糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),；

樣品：人唾液

1.3樣品制備

刺激性唾液收集：采集時(shí)將采集管中的棉棒放入口中咀嚼3~5min，待唾液浸潤棉棒后,，把棉棒放回唾液收集管,，離子（4000r/min，10min）取上清液（唾液量≥1mL）,。

唾液處理：將收集到的唾液樣本立即置于95℃水溶液中30min后去除,，自然冷卻到室溫，經(jīng)臺式離心機(jī)（4000r/min,10min）離心,，取上清液,，用孔徑0.22μm的水系濾膜過濾。最后取適量濾液用水稀釋后（唾液量和稀釋倍數(shù)根據(jù)葡萄糖濃度具體調(diào)節(jié)）,，上機(jī)檢測

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液：準(zhǔn)確稱取0.1g（精確至0.1mg）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品,，用超純水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,，定容至刻度,，配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,。置于0℃~4℃密封,，保存期1個月,。

標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L,、0.08mg/L,、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液?，F(xiàn)配現(xiàn)用,。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L,、0.08mg/L,、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液,。臨用現(xiàn)配,。

表1. 標(biāo)準(zhǔn)系列曲線濃度梯度表

2 測試結(jié)果

2.1 葡萄糖線性測試結(jié)果

依次移取0.04mg/L、0.06mg/L,、0.08mg/L,、0.10mg/L、0.12mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,，按照1.1工作測試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊圖如圖1,，葡萄糖在該色譜條件下線性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上，線性良好,。

圖1.食品中五種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線重疊色譜圖

表2. 線性方程

2.2 樣品測試譜圖

在1.1的工作測試條件下條件下,，將人唾液樣品進(jìn)行檢測。對樣品進(jìn)行精密度測試,。樣品重復(fù)性測試圖譜如圖2所示,，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對稱，分離度良好,，最終得到樣品中葡萄糖含量6.7052mg/L,。

圖2. 樣品重疊譜圖

2.3 樣品精密度測試結(jié)果

在1.1的工作測試條件下，再次收集人唾液樣品進(jìn)行檢測,。對樣品進(jìn)行精密度測試,，測試圖譜如圖3所示，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對稱,，分離度良好,，最終得到復(fù)現(xiàn)樣品中葡萄糖含量12.0558mg/L。

圖3. 樣品復(fù)現(xiàn)測試重疊譜圖

2.4 檢出限測試

在空白樣品中加標(biāo)準(zhǔn)溶液2μg/L,，對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢出限測定,，測試結(jié)果如圖4所示,，其中葡萄糖信噪比為61.607，具體檢出限和定量限如表三所示,，低于方法（T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)）中樣品的定量限的0.11μg/L要求,；

圖4. 檢出限測試圖譜

表3. 檢出限與定量限測定表

2.5 樣品加標(biāo)回收重復(fù)性測試結(jié)果

分別向樣品加2mg/L、4mg/L,、6mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品,，每個濃度3個平行樣品進(jìn)行測定，其測定譜圖分別如圖5-7所示,，其回收率在96.10％~99.50％,。

圖5加標(biāo)2mg/L測試圖譜

圖6. 加標(biāo)4mg/L測試圖譜

圖7加標(biāo)6mg/L測試圖譜

3 總結(jié)

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300對人唾液中的葡萄糖測試進(jìn)行系統(tǒng)適用性、標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證,、重復(fù)性驗(yàn)證,、加標(biāo)回收率驗(yàn)證。測試結(jié)果峰形較好,，線性良好,，重復(fù)性高，靈敏度高,，完全滿足T/SZJL 4-2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)對人唾液中的葡萄糖測試要求,。