皖儀科技離子色譜法測定唾液中的葡萄糖濃度
引言
無創(chuàng)血糖檢測一直備受青睞,，人唾液具有生物信息豐富,、采集安全方便等優(yōu)點，是無創(chuàng)血糖檢測的理想媒介,。作為血糖標(biāo)志物之一的唾液葡萄糖（唾液糖）因時效性更強,，可反映血糖實時信息，受到廣泛研究,。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的唾液糖均值明顯高于糖代謝正常人群,。當(dāng)唾液糖濃度≥20 mg/L時，唾液糖與血糖水平呈顯著正相關(guān),，且此時相關(guān)系數(shù)r最大,。
T/SZJL 4-2023團體標(biāo)準(zhǔn)，實驗離子色譜法測定人唾液中的葡萄糖含量,。已于2023年10月10日正式實施,。
皖儀開發(fā)了一種離子色譜測試方法檢測人唾液中的葡萄糖含量，樣品前處理操作簡單,，重現(xiàn)性好,，準(zhǔn)確性高，完全滿足T/SZJL 4-2023團體標(biāo)準(zhǔn)在對人唾液中葡萄糖的測試要求,。
關(guān)鍵詞：離子色譜,；食品；葡萄糖,；方法學(xué)驗證
1 實驗方法
1.1測試條件
皖儀科技IC6300系列離子色譜儀
儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器（Au工作電極）
自動進(jìn)樣器：AS2800/AS3110
色譜柱：糖類專用色譜柱（4.0mm×250mm）,；
保護柱：糖類專用保護柱（30 mm×4 mm）；
柱溫：30℃,；
流速：0.45ml/min,；
進(jìn)樣量：250μL；
檢測模式：脈沖積分
1.2 使用試劑
淋洗液：A:超純水 B：100mM NaOH C:50mM NaOH+125mM CH3COONa
標(biāo)樣：葡萄糖：純度≥99％或經(jīng)國家認(rèn)證授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),；
樣品：人唾液
1.3樣品制備
刺激性唾液收集：采集時將采集管中的棉棒放入口中咀嚼3~5min,，待唾液浸潤棉棒后，把棉棒放回唾液收集管,，離子（4000r/min,，10min）取上清液（唾液量≥1mL）。
唾液處理：將收集到的唾液樣本立即置于95℃水溶液中30min后去除,，自然冷卻到室溫,，經(jīng)臺式離心機（4000r/min,10min）離心,，取上清液，用孔徑0.22μm的水系濾膜過濾,。最后取適量濾液用水稀釋后（唾液量和稀釋倍數(shù)根據(jù)葡萄糖濃度具體調(diào)節(jié)）,，上機檢測
1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
混合標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液：準(zhǔn)確稱取0.1g（精確至0.1mg）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解,，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,，定容至刻度，配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,。置于0℃~4℃密封,，保存期1個月。
標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L,、0.06mg/L,、0.08mg/L、0.10mg/L,、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液。現(xiàn)配現(xiàn)用,。
1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液:分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L,、0.06mg/L、0.08mg/L,、0.10mg/L,、0.12mg/L的葡萄糖工作標(biāo)準(zhǔn)液。臨用現(xiàn)配,。
表1. 標(biāo)準(zhǔn)系列曲線濃度梯度表
2 測試結(jié)果
2.1 葡萄糖線性測試結(jié)果
依次移取0.04mg/L,、0.06mg/L、0.08mg/L,、0.10mg/L,、0.12mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，按照1.1工作測試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點重疊圖如圖1,，葡萄糖在該色譜條件下線性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上,，線性良好。
圖1.食品中五種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線重疊色譜圖
表2. 線性方程
2.2 樣品測試譜圖
在1.1的工作測試條件下條件下,，將人唾液樣品進(jìn)行檢測,。對樣品進(jìn)行精密度測試。樣品重復(fù)性測試圖譜如圖2所示,，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對稱,，分離度良好，最終得到樣品中葡萄糖含量6.7052mg/L,。
圖2. 樣品重疊譜圖
2.3 樣品精密度測試結(jié)果
在1.1的工作測試條件下,，再次收集人唾液樣品進(jìn)行檢測,。對樣品進(jìn)行精密度測試，測試圖譜如圖3所示,，樣品圖譜中的目標(biāo)離子峰形對稱,，分離度良好，最終得到復(fù)現(xiàn)樣品中葡萄糖含量12.0558mg/L,。
圖3. 樣品復(fù)現(xiàn)測試重疊譜圖
2.4 檢出限測試
在空白樣品中加標(biāo)準(zhǔn)溶液2μg/L,，對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢出限測定，測試結(jié)果如圖4所示,，其中葡萄糖信噪比為61.607,，具體檢出限和定量限如表三所示，低于方法（T/SZJL 4-2023團體標(biāo)準(zhǔn)）中樣品的定量限的0.11μg/L要求,；
圖4. 檢出限測試圖譜
表3. 檢出限與定量限測定表
2.5 樣品加標(biāo)回收重復(fù)性測試結(jié)果
分別向樣品加2mg/L,、4mg/L、6mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品,，每個濃度3個平行樣品進(jìn)行測定,，其測定譜圖分別如圖5-7所示，其回收率在96.10％~99.50％,。
圖5加標(biāo)2mg/L測試圖譜
圖6. 加標(biāo)4mg/L測試圖譜
圖7加標(biāo)6mg/L測試圖譜
3 總結(jié)
本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300對人唾液中的葡萄糖測試進(jìn)行系統(tǒng)適用性,、標(biāo)準(zhǔn)曲線驗證、重復(fù)性驗證,、加標(biāo)回收率驗證,。測試結(jié)果峰形較好，線性良好,，重復(fù)性高,，靈敏度高，完全滿足T/SZJL 4-2023團體標(biāo)準(zhǔn)對人唾液中的葡萄糖測試要求,。
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