皖儀科技液相色譜測定人參中的人參皂苷
前言
人參皂苷是人參的重要活性成分,,屬于三萜類糖苷化合物,,可分為原人參二醇組皂苷(PPD型皂苷)、原人參三醇組皂苷(PPT型皂苷)和齊墩果烷型等,。目前,,已從人參根中分離出40多種人參皂苷。
人參皂苷具有抗氧化,、抗炎,、血管舒張、抗過敏,、抗糖尿病等多種治療作用,。一些人參皂苷通過減少DNA損傷、減少宿主對突變的易感性,、增加免疫監(jiān)測和細胞凋亡等顯示其抗癌特性,。此外,人參皂苷還能有效改善傳統(tǒng)化療藥物的療效,,防止對正常組織的損傷,。
1 實驗方法
1.1 儀器配置
皖儀科技LC3200系列高效液相色譜儀
表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單
1.2 測試條件
色譜柱:C18,5μm,4.6×250mm;
柱溫:35℃;
檢測波長:203nm,;
流速:1.0mL/min,;
流動相:A:乙腈;B:水
進樣量:10μL,;
表2 梯度條件
1.3 儀器及試劑,、耗材
試劑:甲醇:色譜純;乙腈:色譜純,;標準物質:人參皂苷Rg1,、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1,;
輔助裝置:分析天平,;溶劑抽濾裝置;超聲波清洗機,;
實驗材料:濾膜:有機相濾膜,,水相濾膜0.45μm
1.4 對照品制備
n 人參皂苷Rg1對照品溶液:精密稱定人參皂苷Rg1對照品15.0mg,置容量瓶中,,用甲醇稀釋定容至10mL,,制成1.5mg/mL的標準溶液。
n 人參皂苷Re對照品溶液:精密稱定人參皂苷Rg1對照品9.0mg,,置容量瓶中,,用甲醇稀釋定容至10mL,制成0.9mg/mL的標準溶液,。
n 人參皂苷Rb1對照品溶液:精密稱定人參皂苷Rg1對照品15.0mg,,置容量瓶中,用甲醇稀釋定容至10mL,,制成1.5mg/mL的標準溶液,。
混合對照品溶液:分別取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品,、人參皂苷Rb1對照品,,加甲醇制成每1mL中含人參皂苷Rg10.5mg、人參皂苷Re0.3mg,、人參皂苷Rb10.5mg的混合溶液,。
n 人參皂苷Rg1標準系列溶液:取人參皂苷Rg1對照品溶液稀釋制成1mg/L、5mg/L,、10mg/L,、25mg/L、50mg/L,、100mg/L,、500mg/L標準系列溶液,。
2 結果與討論
2.1 標準曲線
圖1人參皂苷Rg1標準曲線及相關系數
說明:人參皂苷Rg1標準曲線線性范圍較好,線性相關系數>0.9999,。2.2 標準品
圖2 人參皂苷Rg1標準品色譜圖
表3 人參皂苷Rg1色譜參數
圖3 人參皂苷Rb標準品色譜圖
表4 人參皂苷Rb色譜參數
圖4 人參皂苷Rb標準品色譜圖
表5 人參皂苷Rb色譜參數
2.3 混標
圖5 人參皂苷混合標準品色譜圖
表6 人參皂苷混合標準品色譜參數
說明:由上述混標譜圖可見,,樣品分離較好,樣品分離度在2.2以上,,滿足分離要求,。2.3 樣品重復性
圖6 人參皂苷混合標準品色譜圖
表7 人參皂苷Rg1、Re,、Rb1標準品重復性色譜參數
說明:重復性較好,,人參皂苷Rg1保留時間RSD值為0.437%,峰面積RSD值為0.443%,;人參皂苷Re保留時間RSD值為0.343%,,峰面積RSD值為0.396%;人參皂苷Rb1保留時間RSD值為0.479%,,峰面積RSD值為0.382%,。
3 結論
本次采用皖儀科技高效液相色譜儀配置二極管陣列檢測器,依據《中國藥典》2020版對人參皂苷進行含量測定,,由上述數據可知,,標準曲線線性范圍較好,線性相關系數>0.9999,;人參皂苷Rg1,、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1理論塔板數分別為91232,、46835、192000,,符合藥典要求理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于6000,;重復性較好,人參皂苷Rg1保留時間RSD值為0.437%,,峰面積RSD值為0.443%,;人參皂苷Re保留時間RSD值為0.343%,峰面積RSD值為0.396%,;人參皂苷Rb1保留時間RSD值為0.479%,,峰面積RSD值為0.382%;人參皂苷Rg1,、Re,、Rb1對照品分離較好,樣品分離度在2.2以上,,滿足分離要求,。
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