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高效液相色譜根據(jù)壓力等級(jí)可分為3類：正相高效液相色譜儀（耐壓5000-6000psi）、反相高效液相色譜儀（耐壓9000-10000psi）和超高效液相色譜儀(超高效液相色譜儀)（耐壓12000,，甚至達(dá)到15000psi以上）,。

1，正相高效液相色譜儀

這并不是常用的高效液相色譜方法,。正相高效液相使用非極性溶劑作為流動(dòng)相,，硅膠顆粒作為固定相,。在常規(guī)高效液相色譜儀中，與非極性化合物相比,，極性化合物在固定相中會(huì)更長(zhǎng)時(shí)間地粘附在極性有機(jī)硅上,。因此，非極性化合物在正常高效液相色譜儀中的洗脫速度更快,?？讖揭话阍?微米左右。

正相色譜法技術(shù)原理： 采用極性固定相（如聚乙二醇,、氨基與腈基鍵合相）,；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷）,，常加入乙醇,、異丙醇、四氫呋喃,、三*甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間,。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物（如酚類、胺類,、羰基類及氨基酸類等）,。

2，反相高效液相色譜儀

這是常見(jiàn)的高效液相色譜類型,。在反相高效液相中,，固定相被烴鏈（通常長(zhǎng) 8-18 個(gè)碳）改性，導(dǎo)致色譜柱變?yōu)榉菢O性,。也使用極性溶劑,。在反相高效液相色譜儀中，樣品中的極性分子會(huì)與溶劑產(chǎn)生強(qiáng)烈的吸引力,，從而使它們更快地洗脫,。它們也不會(huì)與非極性固定相相互作用。非極性化合物會(huì)與固定相產(chǎn)生范德華力和分散相互作用,，因此它們的洗脫速度較慢,。

反相色譜法技術(shù)原理： 一般用非極性固定相（如C18、C8）,；流動(dòng)相為水或緩沖液,，常加入甲醇、乙腈,、異丙醇,、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間,。適用于分離非極性和極性較弱的化合物,。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用更為廣泛,，據(jù)統(tǒng)計(jì),，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右,。

3，超高效液相色譜儀

這類高效液相色譜運(yùn)行速度更快,、使用的溶劑更少且分辨率更高,。色譜柱也更小，固定相顆粒的尺寸要小得多,。較小的孔（亞 2 微米）促進(jìn)了分子更好的分離和分辨率,。較短的色譜柱還可以進(jìn)行快速檢測(cè)。然而,，超高效液相色譜不能用于干燥或未過(guò)濾的樣品,，因?yàn)檩^小的孔會(huì)堵塞，這是一個(gè)昂貴且耗時(shí)的修復(fù)過(guò)程,。

填料材料的新進(jìn)展已經(jīng)開(kāi)始在高效液相色譜儀和超高效液相色譜儀之間創(chuàng)建中間解決方案,。核殼顆粒是目前市場(chǎng)上的一種此類填充材料。使用核殼顆粒的效率與使用亞 2 微米顆粒的效率相同,，但可以在低得多的壓力下運(yùn)行,。甚至有人猜測(cè)這些效率可以在標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜儀機(jī)器上產(chǎn)生。

高效液相色譜機(jī)器通常包含一個(gè)紫外線檢測(cè)器來(lái)測(cè)量樣品中分子發(fā)出的紫外線,。但是,，某些高效液相色譜儀機(jī)器可以與質(zhì)譜儀 (MS) 結(jié)合使用。使用 HPLC-MS 時(shí),，可以通過(guò) m/z 比來(lái)識(shí)別分子,，而無(wú)需知道保留時(shí)間。