LC-MS-MS如何用內(nèi)標定量分析？
Q：本人現(xiàn)在用三重四極桿LC-MS-MS定量分析目標物,，但是沒有標準品,。內(nèi)標法該具體怎么操作呢？資料說先配制一定重量比的待測組分和內(nèi)標樣品的混合物做色譜分析,，測量峰面積,，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標準曲線,，如果這樣的話,，沒有標準品怎么辦？
方法一：
1,、內(nèi)標法進行定量分析,，同樣需要待測物標準品。如果沒有待測物標準品就不能準確測量其含量,，因為無法繪制標準曲線,。
2、沒有待測物標準品不能準確測量其含量,，但可以通過加入內(nèi)標的方法測量待測物的相對含量,，可以比較待測物在各樣品中的多少及相差倍數(shù),。
3、用LC-MS-MS做定量一般都采用MRM的掃描方式,，你沒有待測物標準品,，就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù)，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法,。沒有待測物標準品,，你也無法準確得到待測物在LC上的保留時間，如果你的樣品中有與待測物相似質(zhì)量數(shù)的化合物,，你得到的色譜峰就不會很純凈,，會對你判定那個是你的待測化合物產(chǎn)生干擾。
方法二：沒有標準品,，就只用面積相對定量,。然后選用LC-MS-MS的SIM模式（樣品雜質(zhì)比較少，選擇同位素豐度為*的分子量,，上下增減0.2）,。考察因素導(dǎo)致的量的改變比較微量,，選擇一種物質(zhì)為回收率指示物（反應(yīng)液前處理前加入）,，一種物質(zhì)為內(nèi)標物（前處理后、液相小瓶中進樣測試前,，在待測樣品中加入定量的內(nèi)標物,，然后進行測試）。
LC-MS可以進行定量分析嗎,？
Q：請問液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來用于定性的圖譜是什么樣的,，既然是用質(zhì)譜來進行定量的話，那色譜本身配置的紫外檢測器跑出來的圖譜用于何用,？液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的,，那么一般在藥物代謝動力學(xué)試驗中一般用哪一種呢？尤其是在對體內(nèi)藥物分析時,，內(nèi)標法用于定量的質(zhì)譜圖是什么樣的,？
質(zhì)譜定量分析，使用的一般是LC-MS/MS,不使用LC-MS, 看一下質(zhì)荷比,，推測下分子量,。UV可以用來定量，但是在有紫外吸收的干擾峰的時候,，定量是不準的,。LC-MS/MS使用母離子/子離子來進行定量，相對來說,，干擾要少的多,，也比較準確,，在PK/TK的應(yīng)用很廣泛。這里只有LC-MS/MS定量的譜圖,，僅供參考,！
183.1/141.3 通道的是內(nèi)標，其他的兩個是化合物,。
質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量,。這種定量常通過三重四極桿或離子阱質(zhì)譜實現(xiàn)。要求使用MS/MS的原因是：許多化合物有同樣的質(zhì)量,。當使用Di一個維度即單級質(zhì)譜MS去定量時,，也會缺乏特異性，尤其是對于像血液那樣的復(fù)雜的基質(zhì),。Di二個維度的MS（即MS/MS）在大多數(shù)情況下,，能夠提供wei一的斷裂。合并特異的母離子質(zhì)量和wei一的碎片離子信息,，可以選擇性地監(jiān)測被定量的化合物,。
LC-MS-MS定量分析實例
用LC-Q-TOF-MS 來做代謝組學(xué)，因為是樣品是體液含有多種化合物,，想加入內(nèi)標后先進行一個相對的定量來判斷含量發(fā)生變化的化合物,，怎樣去定量,？用總離子流圖好像不合適,，如果利用峰面積進行相對定量的話，用哪個圖比較合適,？得用標準品才能定性嗎,？
LC-MS-MS定量分析使用SIM 或MRM模式。*的MRM更為準確,。SIM使用Q選擇性的濾過選中的分子量,。但是分子量相同的化合物很多，所以,，如果樣品稍微復(fù)雜的話,，SIM基本不合適。
MRM選擇母離子和子離子,。使用Q過濾母離子,，q 轟擊母離子，TOF過濾子離子,，使子離子被檢測器檢測到,。分子量相同，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了,。所以,，MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法,。MRM檢測是離子對。
內(nèi)標的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測化合物類似,。結(jié)構(gòu)相同或類似,，主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代化合物,。內(nèi)標的選擇還要求其分子量與待測物質(zhì)不重合（還需要盡量避開化合物的isotopic peak的m/z）,，并且可以和待測物質(zhì)分開。
如果使用MRM, 樣品被分開的話,，那么理論上來說總離子流圖上的每個峰都是代表一種物質(zhì),。同時使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊,，那么,，即使在柱子中不被分開的化合物，也是可以認為在MS中被分開了,。
液質(zhì)中幾個峰,，MRM檢測到幾十個物質(zhì)就是多個物質(zhì)在同一時間從色譜柱跑出來了。雖然出峰時間一樣,，但是每個化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來的,，只不過報道中由于篇幅有限，會被簡略掉,。
定性的話,，需要標品，retention time 需要一致,。
定量的話,，需要先作標準曲線。
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