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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成,，用來監(jiān)測(cè)循環(huán)過程的熒光,。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示,。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對(duì)于循環(huán)數(shù)的圖表,。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正?；幚韥韽浹a(bǔ)背景熒光的差異。正?；罂梢栽O(shè)定域值水平,，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。

設(shè)備簡介

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀+實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件,，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng),。

優(yōu)勢(shì)

樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值（限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù)）,。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為大，這樣可以獲得準(zhǔn)確,，可重復(fù)性的數(shù)據(jù),。如果同時(shí)擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,，可以用來計(jì)算未知樣品的濃度,。

醫(yī)療應(yīng)用

⑴ 病原體檢測(cè)

目前，采用熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)淋球菌,、沙眼衣原體,、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒,、單純皰疹病毒,、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒,、流感病毒,、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測(cè)定,。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有靈敏度高,、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn),。

如：結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在：

a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌,；

b.檢測(cè)TB耐藥基因；

c.提高TB的陽性檢出率,。

⑵ 產(chǎn)前診斷

到目前為止,，人們對(duì)遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療，只能通過產(chǎn)前監(jiān)測(cè),，減少病嬰出生,，以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法，易為孕婦所接受,。

⑶ 藥物療效考核

對(duì)乙型肝炎病毒(HBV),、丙型肝炎病毒(HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達(dá),，干擾素治療作用不敏感,，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定治療過程中,，HBV-DNA的血清含量曾有下降,，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發(fā)生變異,。如PCR技術(shù)在HBV檢測(cè)中的應(yīng)用及意義：

a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量,。

b.是否復(fù)制。

c.是否傳染,，傳染性有多強(qiáng),。

d.是否有必要服藥。

e.肝功能異常改變是否由病毒引起,。

f.判斷病人是適合用哪類抗病物,。

g.判斷藥物治療的療效。

⑷ 腫瘤基因檢測(cè)

盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚,，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受,。癌基因的表達(dá)增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn),。實(shí)時(shí)熒光定量PCR不但能有效地檢測(cè)到基因的突變,，而且可以準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量。目前用此方法進(jìn)行過端粒酶hTERT基因,、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因,、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因,、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測(cè),。隨著與腫瘤相關(guān)的新基因的不斷發(fā)現(xiàn)，熒光定量PCR技術(shù)將會(huì)在腫瘤的研究中發(fā)揮更大的作用,。

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