ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞

（Human Ovarian Clear Cell Carcinoma Cells）

ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞

一、T25 細(xì)胞收到后處理

1,、觀察

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿完*培養(yǎng)基并密封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法,。收到細(xì)胞后，請

先打開外包裝,，及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致,，并仔細(xì)查看培養(yǎng)瓶是否有

破損或漏液等異常情況，如有破損或漏液等異常情況,，請立即拍照,，并聯(lián)系工作人員處理。

2,、處理

（1）75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部,。

（2）待酒精揮發(fā)完*，在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（40x,，100x，200x,，

各三張）,。前三天的細(xì)胞照片為重要的售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到時細(xì)胞狀態(tài)良好,。

（3）不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中靜置 2-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

（4）查看細(xì)胞說明書,，按照細(xì)胞說明書中描述的培養(yǎng)參數(shù)進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)操作（見“細(xì)胞說明書"第一

頁）。 ? 貼壁細(xì)胞

? 未超過 80%匯合度時,，將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中（對比培養(yǎng)使用）,，留大約

7mL 完*培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。

? 超過 80%匯合度時,，將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中（對比培養(yǎng)使用），根據(jù)情況進(jìn)

行傳代或者凍存,，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。首*傳代，建議 1:2 進(jìn)行傳代（分兩個 T25）,。傳代時

建議一瓶用原瓶中的完*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自行配制的完*培養(yǎng)基，二者進(jìn)行對比培養(yǎng),。

? 若細(xì)胞貼壁不牢,，在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)液收集至

50mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘,，收集上清（對比培養(yǎng)使用）,，往細(xì)胞沉淀中加入胰，酶 1-2mL,，

輕輕吹打,，重懸，消化 1-2 分鐘后,，加入 5mL 完*培養(yǎng)基終止消化,。1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上

清,，加入 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后按 1:2 的比例進(jìn)行傳代（分兩個 T25），補(bǔ)充完*培養(yǎng)基

至 5-8mL/瓶，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 二,、凍存細(xì)胞收到后處理

1、觀察

收到細(xì)胞后,，請檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰,。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問題,，請立即

拍照,，并聯(lián)系工作人員處理。

2,、處理

（1）迅速將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮保存,，建議盡早復(fù)蘇。

（2）復(fù)蘇第一管如有細(xì)胞活性問題,，請對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（40x,，100x，200x,，各三張）,，并及時

聯(lián)系工作人員處理，后續(xù)會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管,。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇

第二管,，出現(xiàn)問題不予售后。

三,、細(xì)胞復(fù)蘇

（1）確認(rèn)水浴鍋已升溫至 37℃,，取 5mL 預(yù)熱的完*培養(yǎng)基于 15mL 離心管中待用。

（2）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆面具）,，快速將其置入 37℃水浴中解凍,，直至凍存管中

無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,。

（3）將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5mL 完*培養(yǎng)基的 15mL 離心管中,，1000rpm 離心 5 分鐘。

（4）棄盡上清,，細(xì)胞沉淀用 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸,，接種至 T25 培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶,，

放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

（5）貼壁 5 小時以上或次日，更換新鮮的完*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。 四,、細(xì)胞傳代

（1）細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。首先,，棄去培養(yǎng)上清,，用 PBS 漂洗細(xì)胞 1-2 次。

（2）加入 1-2mL 消化液,，置于培養(yǎng)箱中消化適當(dāng)時間,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部

分變圓并脫落,，即消化完*，將細(xì)胞迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化,。

（3）輕輕吹打細(xì)胞，待細(xì)胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,，1000rpm 離心 5 分鐘,。

（4）棄去上清液，然后按推薦比例進(jìn)行分瓶傳代（收到細(xì)胞后首*進(jìn)行傳代,，推薦 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳

代）,，補(bǔ)充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶。

（5）放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。 五,、細(xì)胞凍存

（1）細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。首先，棄去培養(yǎng)上清,，用 PBS 漂洗

細(xì)胞 1-2 次,。

（2）加入 1-2mL 消化液，置于培養(yǎng)箱中消化適當(dāng)時間,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部

分變圓并脫落，即消化完*,，將細(xì)胞迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化。

（3）輕輕吹打細(xì)胞,，待細(xì)胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,，1000rpm 離心 5 分鐘。

（4）棄去上清液,，往細(xì)胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無血清凍存液（貨號：PZ110R）,，混勻后加入凍存

管中，并做好標(biāo)記。

（5）將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可（如果追求更理想的細(xì)胞復(fù)蘇率,，也可選擇使用程序降溫盒）,，

24 小時后轉(zhuǎn)入液氮中長期儲存，并做好儲存記錄,。