在定量PCR時，我們常常糾結(jié)一個問題,，究竟是相對定量還是定量呢？如今,，你無需糾結(jié)了,，因為數(shù)字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似,，都是估計起始樣品中的核酸量,，但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),，是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異,、突變檢測,、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結(jié)果驗證,、miRNA表達分析,、單細胞基因表達分析等。[1-2] 技術(shù)發(fā)展
20世紀末,，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digitalPCR,，dPCR)的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,，分配到不同的反應單元,，每個單元至少包含一個拷貝的目標分子(DNA模板)，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增,，擴增結(jié)束后對各個反應單元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析,。[1][3]
數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)。當前核酸分子的定量有三種方法,，光度法基于核酸分子的吸光度來定量,；實時熒光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環(huán)數(shù),；數(shù)字PCR是的定量技術(shù),，基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法,。主要采用當前分析化學熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,，每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,，沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積,，就可以推算出原始溶液的核酸濃度,。
原理
PCR實際上是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下,，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應,，擴增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。
