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熒光定量PCR儀的通道分類與選購(gòu)指南
隨著醫(yī)療器械與電子技術(shù)的深度結(jié)合,，使得熒光定量PCR在各個(gè)領(lǐng)域，包括人類身份鑒定,、病原體檢測(cè),、產(chǎn)前診斷、藥物療效考核,、腫瘤基因檢驗(yàn)都有廣泛應(yīng)用,。各大醫(yī)院、科研機(jī)構(gòu),、實(shí)驗(yàn)室等場(chǎng)所都隨處可見(jiàn),，但是，他們選購(gòu)熒光定量PCR時(shí)可能會(huì)遇到這樣的問(wèn)題：到底選購(gòu)幾通道的合適呢,？
先先帶大家了解一下什么是所謂的通道呢,？
顧名思義，通道（channel）指的是針對(duì)每一種熒光的檢測(cè)器,，比如你在一個(gè)管中做多個(gè)顏色,，針對(duì)多個(gè)靶基因。每個(gè)顏色需要一個(gè)檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱,，每一個(gè)針對(duì)不同顏色的檢測(cè)器,，就是一個(gè)通道。
目前市面上大部分熒光定量PCR儀在設(shè)計(jì)時(shí)已經(jīng)固定了熒光通道數(shù),，因此大家在選擇儀器時(shí)會(huì)比較慎重,，通道數(shù)選少了擔(dān)心無(wú)法滿足后續(xù)新的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用；通道數(shù)選多了一是擔(dān)心購(gòu)置預(yù)算不足,，二是擔(dān)心某些通道可能一直閑置,，用不上,，造成資源浪費(fèi)。
正因?yàn)槊總€(gè)光學(xué)卡夾都是一套獨(dú)立的光路,，因此您可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的當(dāng)前的購(gòu)置預(yù)算以及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用需求選擇單、雙,、三,、四、五或六個(gè)熒光通道,。如果未來(lái)有新的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,，也只需要添加相應(yīng)的卡夾即可實(shí)現(xiàn)升級(jí)，實(shí)驗(yàn)室人員自己就可以進(jìn)行安裝,。
除了在通道選擇上的靈活性,，帶有卡夾式光路設(shè)計(jì)的熒光定量分析儀的好處還在于：每個(gè)卡夾都針對(duì)特定的波段進(jìn)行了優(yōu)化，因此針對(duì)特定的染料的檢測(cè)效果,。
此外,，每個(gè)卡夾有8個(gè)光源和檢測(cè)器，對(duì)應(yīng)96孔板的一列,，檢測(cè)時(shí)以一列即8孔為單位進(jìn)行,，相較于單孔檢測(cè)的方式，速度會(huì)更快,?？▕A排列于卡夾盒中，檢測(cè)時(shí)所有卡夾在卡夾盒中移動(dòng)完成對(duì)96孔板的信號(hào)收集,，完成96孔板6個(gè)通道的一次信號(hào)采集時(shí)間小于3秒,，因此也可以大大縮短多重PCR的時(shí)間。
目前市面上生產(chǎn)熒光定量PCR 的廠家非常多,，如何選擇合適的熒光定量?jī)x器也變得非常重要,。面對(duì)性能不同的產(chǎn)品，選購(gòu)商品時(shí)也變得眼花繚亂起來(lái),。這時(shí),，就有人一不下心走進(jìn)了“選購(gòu)誤區(qū)”。
在使用有些廠家5通道的熒光定量?jī)x時(shí),，為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX（一種熒光染料）或的Referencedye,，這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道。
這樣以來(lái)，真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè),，而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本,。有的熒光定量PCR的檢測(cè)通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開(kāi)放的，有效檢測(cè)通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多,。在購(gòu)買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測(cè)通道尤為重要,，不能單單只聽(tīng)宣傳。
考慮多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),，多重PCR并非人人適用,、人人可用，因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了,。
熒光定量pcr儀的使用也應(yīng)征求實(shí)驗(yàn)科研人員的建議,，畢竟真正使用器械做實(shí)驗(yàn)的還是他們。