Cy5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)

一. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Cy5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過(guò)抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴氨酸）,，簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與Cy5熒光染料的共價(jià)偶聯(lián),。此為通用型試劑盒,，適合Cy5熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成,，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右,。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy5熒光染料,，且不會(huì)損失抗體/蛋白,。

二. 試劑盒組成與存儲(chǔ)

收到后將Cy5-mix(含10 % Cy5染料)儲(chǔ)存在-20?C。Coupling Reagent,、Cy5-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長(zhǎng)期保存,。

三. 實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10mg)，溶解于1 mL純水中,，加入100 μL Coupling Reagent,，混合均勻待用,。

注：抗體/蛋白在1~10 mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent,。超出此范圍,，請(qǐng)按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白,，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent,。

(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)

2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱取0.1 ~1 mg Cy5-mix固體加至第1步溶液,，充分混合溶解,。

注：(a) 若Cy5-mix用量超出1 mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過(guò)量,，引起熒光部分淬滅;

(b) 若低于1 mg的Cy5-mix難以稱取,，可先取1 mg Cy5-mix固體溶解于100 μL Cy5-mix溶解液，再按需取Cy5-mix溶液加至第1步溶液,。由于Cy5-mix溶解后易分解,，溶液須盡快使用且不可保存。

3. 室溫避光反應(yīng)30 min,，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間不影響偶聯(lián)效率,。

4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000rpm超濾5min,，即可除去未反應(yīng)的Cy5-mix,，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白,，重復(fù)超濾1~2次,。

5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy5熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液,。

四. 注意事項(xiàng)

1. 熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分,，建議低于以下比例:

注：若以上干擾組分超出建議比例,，可先通過(guò)超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記,。

2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存,。通常在4 ℃下可保存6~12個(gè)月。如需保存更長(zhǎng)時(shí)間,，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油,，在-20℃保存。