液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
1．進(jìn)樣系統(tǒng)
液相色譜儀一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,，進(jìn)樣量是恒定的,。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
2．輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l．47～4．4X10Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定,，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí),，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度,，這對(duì)提高分辨率,、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動(dòng)相貯存器和梯度儀,，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性,、離子強(qiáng)度,、PH值，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離,。
3.分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長(zhǎng)度為10～50cm(需要兩根連用時(shí),，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm,，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)．固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹(shù)脂或硅膠構(gòu)成,，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去),、多孔性(孔徑可達(dá)1000)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過(guò)機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基,、季胺基、氨基或各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物,。因此,，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來(lái),。另外，固定相基質(zhì)粒小,，柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng),?；|(zhì)粒度小，微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析,，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大,。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,，會(huì)提高分辨率的道理。再者,，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,，通過(guò)改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間,，就可增加層析柱的效率,。
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