1.污染

Q：以下圖片中的細(xì)胞是否已污染,？這些小黑點(diǎn)，PBS沖洗能去掉大部分,，但第二天會重新出現(xiàn),。

A：圖中的細(xì)胞存在微生物污染,，在細(xì)胞與細(xì)胞間隙之間，有大量的小黑點(diǎn)聚集，且形狀基本上都是規(guī)則的顆粒狀,。

當(dāng)使用PBS沖洗時,，能洗掉大部分，但卻無法全部清楚,，因為只要?dú)埩魳O少量的微生物,，還是會繼續(xù)繁殖的。

從問題描述來看,，PBS沖洗后第二天黑點(diǎn)就重新出現(xiàn),，憑這一點(diǎn)就可以輔助我們進(jìn)行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后,，黑點(diǎn)不再出現(xiàn),，那么黑點(diǎn)可能只是培養(yǎng)物碎片/雜質(zhì)，但如果會不斷增加,、無法全部清除,，就肯定是污染。

有同學(xué)可能會疑惑,，我不是在培養(yǎng)基中加了雙抗么,，為什么還會污染呢？

雙抗,，能抑制微生物增殖，但無法全部殺滅微生物,。當(dāng)污染達(dá)到一定程度后,，雙抗也就無法繼續(xù)抑制它們的增殖，而隨后,，你就能在顯微鏡下看到微生物污染了,。此時，雙抗對微生物的影響已經(jīng)失效,。

對于上圖的細(xì)胞,，我們只能扔棄，避免其波及其他培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞,。

相應(yīng)的,，這里也貼出一張正常狀態(tài)、沒有微生物污染的細(xì)胞,，在視野內(nèi)細(xì)胞與細(xì)胞的間隙是很干凈的,，沒有黑點(diǎn)、桿狀,、絲狀物,，細(xì)胞也基本上是完好無損的，沒有解體的細(xì)胞。

2.傳代

Q：以下圖中的細(xì)胞狀態(tài)正常嗎？繼續(xù)培養(yǎng)還是消化傳代,？

A：圖中的細(xì)胞密度已經(jīng)達(dá)到了100%,，細(xì)胞與細(xì)胞之間已經(jīng)沒有任何空隙,，所以我們看到這些細(xì)胞都擠成一堆了，它原本是什么形態(tài)的根本無法觀察出來,。

當(dāng)細(xì)胞的密度達(dá)到100%時,，細(xì)胞就會與周圍的細(xì)胞全部貼合在一起，產(chǎn)生“接觸抑制",，表現(xiàn)為停止增殖,，隨后就是細(xì)胞狀態(tài)開始下滑——進(jìn)入衰退。

如果拿這個狀態(tài)的細(xì)胞去做實(shí)驗,，效果會受到影響,。大家要盡量避免細(xì)胞長得太密才進(jìn)行消化傳代。以下是我們之前提供過的一張細(xì)胞密度示意圖,。一般來說,，80%-90%的密度就可以消化了。

3.復(fù)蘇

Q：以下圖中的細(xì)胞是復(fù)蘇后第二天的，細(xì)胞（貼壁生長的）還活著嗎,？

A：復(fù)蘇后的細(xì)胞,，如果是貼壁生長的,，一般種入培養(yǎng)器皿后大約10-16小時就可以貼壁生長了。

解凍的過程也要盡快完成，可以嘗試拿一個塑料薄膜手套裝著凍存管,，然后鑷子夾住管子和薄膜手套部分,，深入水中不斷搖晃，觀察到管內(nèi)已經(jīng)全是液體后,，立即停止并盡快進(jìn)入下一步操作,。

以上就是本期答疑帖的全部內(nèi)容，如果需要PBS,、雙抗溶液可以向我們咨詢,，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力,、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),。總部設(shè)在廣東,，服務(wù)面向全國,。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗室耗材銷售,、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù),。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué),、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu),、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品,、技術(shù)支持與服務(wù)?？梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù),。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁,。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,，隨時為客戶提供服務(wù)