支原體是什么,？如何判斷細(xì)胞是否被支原體感染？如果感染了,，細(xì)胞應(yīng)該如何處理？

以上三個(gè)問(wèn)題,，大多數(shù)養(yǎng)細(xì)胞的同學(xué)都會(huì)遇到,，我們今天就講一下支原體污染的問(wèn)題。

支原體,，是一種沒(méi)有細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，在獨(dú)立生活和細(xì)胞內(nèi)寄生之間存活的原核生物,，其結(jié)構(gòu)和典型的細(xì)菌相近,。

部分支原體可以致病，例如肺部支原體,。由于支原體沒(méi)有細(xì)胞壁,，許多常見(jiàn)的抗生素，如青霉素對(duì)其沒(méi)有殺傷力,。

和常見(jiàn)的細(xì)菌污染不同,，細(xì)胞被支原體污染后，采用常規(guī)顯微鏡無(wú)法直接在明場(chǎng)視野下看到支原體,，后者也并不會(huì)直接破壞宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu),，而是改變細(xì)胞的代謝。

所以,，細(xì)胞往往表現(xiàn)出生長(zhǎng)狀態(tài)變差,，例如生長(zhǎng)緩慢，不像細(xì)菌污染那樣大量死亡,。因此,，被支原體污染的細(xì)胞是很難察覺(jué)出異樣的。

那么,，如何判斷細(xì)胞是否被支原體污染呢,？

常用的方法有熒光染色、PCR,、ELISA,、免疫染色、放射自顯影以及微生物學(xué)分析,。

對(duì)于大多數(shù)同學(xué)而言,，最簡(jiǎn)的辦法，應(yīng)該是采用熒光染色,。具體來(lái)說(shuō),，就是使用Hoechst 33258對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。

其原理是被染色后的細(xì)胞,，在50X或100X目鏡下觀察,，可以看到細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)上有明確的藍(lán)色熒光微?；蚪z狀物,，后者就是支原體的標(biāo)志特征。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版 配圖

使用Hoechst 33258進(jìn)行染色的實(shí)驗(yàn)方法見(jiàn)下圖（參考資料：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版）,。

如果實(shí)驗(yàn)室有條件的同學(xué)，也可以直接購(gòu)買商業(yè)化的檢測(cè)試劑盒,，這樣會(huì)更加方便和高效,。

我們之前講過(guò),，如果細(xì)胞被微生物污染,，例如細(xì)菌，那么應(yīng)該直接把被污染的細(xì)胞清理掉,，而不是嘗試挽救,。

同理，當(dāng)細(xì)胞被確認(rèn)感染了支原體后,，第一選擇的處理措施依然也是清理掉污染的細(xì)胞,。

除非該細(xì)胞非常重要，或無(wú)法替代,，此時(shí)我們可以嘗試去除支原體污染,。以下，我們也為大家分享支原體清除的實(shí)驗(yàn)操作建議,。（參考資料：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版）

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