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當前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>細胞被支原體污染怎么辦?
支原體是什么,?如何判斷細胞是否被支原體感染?如果感染了,,細胞應該如何處理,?
以上三個問題,大多數(shù)養(yǎng)細胞的同學都會遇到,,我們今天就講一下支原體污染的問題,。
支原體,,是一種沒有細胞壁結構,,在獨立生活和細胞內(nèi)寄生之間存活的原核生物,其結構和典型的細菌相近,。
部分支原體可以致病,,例如肺部支原體。由于支原體沒有細胞壁,,許多常見的抗生素,,如青霉素對其沒有殺傷力。
和常見的細菌污染不同,,細胞被支原體污染后,,采用常規(guī)顯微鏡無法直接在明場視野下看到支原體,后者也并不會直接破壞宿主細胞結構,,而是改變細胞的代謝,。
所以,細胞往往表現(xiàn)出生長狀態(tài)變差,,例如生長緩慢,,不像細菌污染那樣大量死亡。因此,,被支原體污染的細胞是很難察覺出異樣的,。
那么,,如何判斷細胞是否被支原體污染呢,?
常用的方法有熒光染色、PCR,、ELISA,、免疫染色、放射自顯影以及微生物學分析,。
對于大多數(shù)同學而言,,最簡的辦法,,應該是采用熒光染色。具體來說,,就是使用Hoechst 33258對細胞進行染色,。
其原理是被染色后的細胞,在50X或100X目鏡下觀察,,可以看到細胞核呈藍色熒光,,細胞內(nèi)染色質(zhì)上有明確的藍色熒光微粒或絲狀物,,后者就是支原體的標志特征,。
動物細胞培養(yǎng) 第7版 配圖
使用Hoechst 33258進行染色的實驗方法見下圖(參考資料:動物細胞培養(yǎng) 第7版),。
如果實驗室有條件的同學,,也可以直接購買商業(yè)化的檢測試劑盒,這樣會更加方便和高效,。
我們之前講過,如果細胞被微生物污染,,例如細菌,,那么應該直接把被污染的細胞清理掉,而不是嘗試挽救,。
同理,,當細胞被確認感染了支原體后,第一選擇的處理措施依然也是清理掉污染的細胞,。
除非該細胞非常重要,,或無法替代,此時我們可以嘗試去除支原體污染,。以下,我們也為大家分享支原體清除的實驗操作建議,。(參考資料:動物細胞培養(yǎng) 第7版)
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