細胞計數(shù)在細胞實驗中是非常常見的,，大多數(shù)實驗室目前使用細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù),，細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)如下圖所示：

實驗步驟

1.所用細胞密度達到一定要求后進行細胞計數(shù)鋪板,，提前準備好細胞計數(shù)板,、蓋玻片,、計數(shù)器,；

2.棄掉原有培養(yǎng)基，加入1ml溫浴的PBS緩沖液清洗,；

3.棄掉PBS緩沖液,，加入胰酶消化細胞，消化時間根據(jù)細胞類型及日常經(jīng)驗決定,；

4.消化相應(yīng)時間后,，加入二倍體積的培養(yǎng)基終止消化，用移液器將細胞全部吹下,，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),；

5.離心機室溫800rpm,離心5min；

6.準備和所計數(shù)細胞種類相同的1.5ml Ep管,，各加入PBS緩沖液980ul備用,；

7.準備細胞計數(shù)板，并在計數(shù)區(qū)蓋上蓋玻片,；

8.將5中離心結(jié)束的細胞棄上清,，加入1ml培養(yǎng)基，充分混懸后取20ul加入到6中的Ep管中,，充分顛倒混勻后取12ul加入牛鮑計數(shù)板一側(cè)的計數(shù)區(qū)內(nèi),，保證計數(shù)區(qū)充盈。

9.低倍顯微鏡（物鏡4）下找到計數(shù)視野，上圖中“"B C D E“"區(qū)為細胞計數(shù)區(qū),。

10.高倍鏡（物鏡10）下計數(shù)細胞,，依次計數(shù)4個方格內(nèi)的細胞數(shù)量。

11.計算細胞數(shù)量,，假設(shè)4個方格內(nèi)細胞總數(shù)為A,則每ml的細胞數(shù)量為：A/4×104×50（稀釋倍數(shù)）=B個,。

12.假設(shè)鋪板所需細胞密度為1×104個/ml，則所需8中的細胞混懸液的量為：1×104×C（培養(yǎng)基所需毫升數(shù),，如6孔板每孔加培養(yǎng)基2ml）/B=D ml,，最后換算成μl即可。

13.鋪板：取C ml培養(yǎng)基,，加入8中細胞混懸液D μl,，充分混勻后依次加入培養(yǎng)皿中，放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)即可,。

4.細胞混懸液加入細胞計數(shù)板時,，建議使用10μl小槍頭,、2-20μl移液器，槍頭傾斜抵住蓋玻片邊緣,，緩慢加入,，務(wù)必保證細胞混懸液全部加入，計數(shù)區(qū)充盈,。

關(guān)于細胞計數(shù),，以如下實例來充分理解上述計算過程：

4.鋪板：培養(yǎng)基5孔（為防止不夠所以多準備1孔）2ml×5孔=10ml加入細胞混懸液800μl,，混勻加入六孔板即可,。

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