1,、最好使用一次性進口 tip 頭,，以避免液體殘留,；同時，tip 頭不要長時間暴露于空氣中,，避免氣溶膠的污染,。

2、加樣時,，tip 頭要伸入 PCR 反應管的液面下一點,，然后將液體緩緩打入液面下，至恰好打出一個小氣泡為至,；加樣過程最好在冰塊上操作,；移液槍用完之后要歸到最大計量的位置,，防止久而久之彈簧失去彈性,，而導致加樣量的不準確。

3,、配制反應體系時,，若反應物為凍結(jié)制品,，需在融解后上下顛倒輕輕均勻混合；加入試劑之前,，把它混勻一下,，以免放置時間長了濃度不均；按照液體體積由大到小的順序?qū)⒎磻锛尤氲?nbsp;PCR 管中,；引物和模板和體系所加的比例要合適,，模板過量反而會抑制體系的反應。

4,、 操作多份樣品時,，可先制備反應混合液，即將 dNTP,、緩沖液,、引物和酶混合好后分裝，這樣即可避免污染,，又可增加反應的精確度,。

5、避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心,；PCR 產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為 48h 以內(nèi),，有些最好于當日電泳檢測，大于 48h 后帶型不規(guī)則甚至消失,。

6,、如凝膠分析擴增產(chǎn)物只有一條帶，不需要用凝膠純化,。如可見其他雜帶,，可能是積累了大量引物的二聚體。少量的引物二聚體的摩爾數(shù)也很高,，這會產(chǎn)生高比例的帶有引物二聚體的克隆,，而非目的插入片段。為此需在克隆前做凝膠純化,。

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