一,、材料

1. 緩沖液、試劑和溶液

75% 乙醇 (超純水配制）

糖原,，5 mg/ml(Ambion,，Austin，TX)

StratageneRNA 提取試劑盒（200345，StratageneCloningSystems,，LaJolla,CA),，

包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C),、β-巰基乙醇 (存于 4°C),、氯仿：異戊醇、

2mol/L 乙酸鈉,、異丙醇,。或者使用 PicoPureRNA 分離試劑盒（KIT0202,，Arcturus,，

MountainView,CA)

DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories，Houston,，TX)(4°C 儲存）

2. 特殊設備

移液器

無 RNA 酶的 1.5 ml 管子

3. 細胞和組織

來自方案 3 的 LCM 帽子

二,、方法

1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

2. 將 LCM 帽子插入管子,，渦旋 5s,。

3. 倒置管子孵育 5 min。

4. 移去 LCM 帽子,。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月,。

5. 將溶液轉移到 1.5 ml 管子中。

6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉,，溫和混勻,。

7. 加入 220ul 水飽和的酚（底層），溫和混勻,。

8. 加入 60ul 氯仿：異戊醇,，劇烈晃動。

9. 放于冰上 15 min,。

10.14000r/min4°C 離心 30 min,。

11. 吸上層溶液到新管子中。

12. 加入 2ul 糖原（最終濃度 10~150ug/ml),。

13. 加入 200ul 冷異丙醇,。

14.-80°C 過夜。

深圳安培生物科技有限公司,，是一家具有核心的技術實力,、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東,，服務面向全國,。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售,、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,，旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學,、細胞生物學,、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線,，在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩(wěn)定的產(chǎn)品,，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優(yōu)質客戶提供優(yōu)質的產(chǎn)品,、技術支持與服務,。

從有限的細胞中提取 RNA

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