各種單糖和麥芽糖是還原糖,，蔗糖和淀粉是非還原糖,。利用溶解度不同，可將植物樣品中的單糖,、雙糖和多糖分別提取出來(lái),，再用酸水解法使沒(méi)有還原性的雙糖和多糖徹-底水解成有還原性的單糖。在堿性條件下,，還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)）,，還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物,，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系,，在540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光值,，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量,。多糖水解時(shí),，在單糖殘基上加了一分子水，因而在計(jì)算中須扣除已加入的水量,，測(cè)定所得的總糖量乘以0.9 即為實(shí)際的總糖量,。
一、實(shí)驗(yàn)材料,、儀器和試劑
1,、實(shí)驗(yàn)材料：面粉。
2,、儀器： (1) 25ml 血糖管或刻度試管×11,；(2) 大離心管或玻璃漏斗×2；(3) 燒杯：100ml×1,；(4) 三角瓶：100ml×1,；(5) 容量瓶：100ml×3；(6) 刻度吸管：1ml×11,、2ml×4,、10ml×1；(7) 恒溫水??；(8) 沸水浴,；(9) 離心機(jī)(過(guò)濾法不用此設(shè)備),；(10)電子天平；(11)分光光度計(jì),；
3,、試劑：
(1) 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取 100 mg分析純葡萄糖(預(yù)先在 80 ℃烘至衡重)，置于小燒杯中,，用少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中,，以蒸餾水定容至刻度,，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
(2) 3,5-二硝基水楊酸試劑：將6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2NNaOH 溶液,，加到500ml含有185g酒石酸甲鈉的熱水溶液中,，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml,，貯于棕色瓶中備用,。
(3) 碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100ml 蒸餾水中,。
(4) 酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞,，溶于250ml 70%乙醇中。
(5) 6NHCl
(6) 6NNaOH
二,、操作步驟
1,、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：
取7支具有25ml刻度的血糖管或試管，編號(hào),，按下表所示的量,，精確加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。
將各管搖勻,，在沸水浴中加熱5分鐘,，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25ml刻度處,，用橡皮塞塞住管口,，顛倒混勻（如用大試管，則向每管加入21.5ml蒸餾水,，混勻）,。在540nm波長(zhǎng)下，用0號(hào)管調(diào)零,，分別讀取1-6號(hào)管的消光值,。以消光值為縱坐標(biāo)，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
2、樣品中還原糖和總糖的測(cè)定：
（1）樣品中還原糖的提?。?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
準(zhǔn)確稱取2g食用面粉,，放在100ml的燒杯中，先以少量的蒸餾水調(diào)成糊狀,，然后加50ml蒸餾水,，攪勻，置于50℃恒溫水浴中保溫20分鐘,，使還原糖浸出,。離心或過(guò)濾，用20ml蒸餾水洗殘?jiān)?，再離心或過(guò)濾,，將兩次離心的上清液或?yàn)V液全部收集在100ml的容量瓶中,，用蒸餾水定容至刻度，混勻,，作為還原糖待測(cè)液,。
(2)樣品中非還原糖的水解和提取：
準(zhǔn)確稱取1 g食用面粉,，放在100ml 的三角瓶中,，加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸餾水，置于沸水浴中加熱水解30分鐘,。取1~2 滴水解液于白瓷板上,，加1滴碘-碘化鉀溶液，檢查水解是否完-全,。如已水解完-全,，則不顯藍(lán)色。待三角瓶中的水解液冷卻后,，加入一滴酚酞指示劑,，以6NNaOH中和至微紅，過(guò)濾,，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙,，將濾液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度,，混勻,。精確吸取10ml定容過(guò)的水解液，移至另一100ml的容量瓶中,，定容,，混勻，作為總糖待測(cè)液,。
(3)顯色和比色：
取5支25ml刻度的血糖或刻度試管,，編號(hào)，按下表所示的量,，精確加入待測(cè)液和試劑,。
