原理

還原糖是具有羰基（>C=O）的糖，能將其它物質(zhì)還原而其本身被氧化,。

（1） 還原糖在堿性條件及有酒石酸鉀鈉存在下加熱，可以定量地還原二價銅離子為一價銅離子，產(chǎn)生磚紅色的氧化亞銅沉淀,，其本身被氧化。具體反應(yīng)如下：

（2）氧化亞銅在酸性條件下,，可將鉬酸銨還原,，還原型的鉬酸銨再與砷-酸氫二鈉起作用，生成一種藍色復(fù)合砷鉬藍,，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖的含量（即被還原的Cu2O 量）成正比,，用標準葡萄糖與砷鉬酸作用，比色后做標準,，就可測得樣品還原糖含量,。

材料與儀器

步驟

1.標準曲線的制作：

在一系列刻度試管中，分別加入200μg/mL 標準葡萄糖0,、0.1,、0.2、0.3,、0.4,、0.5及0.6 mL，再順序加入蒸餾水2,、1.9,、1.8、1.7,、1.6,、1.5 及1.4 mL，配成濃度分別為0,、10,、20、30,、40,、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL，混勻后沸水浴中加熱10min,，立即冷卻,，再加入2mL 砷鉬酸試劑，振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計在620nm 波長下比色,，測其光密度OD620nm（做一式兩份）,。以糖濃度微克數(shù)為橫坐標，光密度OD620nm 為縱坐標,，繪制標準曲線,。

2.植物樣品中還原糖的提取：

將樣品洗凈,，吸干其表面水分,，切碎混勻，稱取1g 放入研缽中,，加入約0.5g 石英砂,，磨成勻漿，加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中,，加水達70-80mL,，搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。

待上述樣品冷卻后,，沉淀蛋白質(zhì),，加入5%硫酸鋅5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL,，以沉淀蛋白質(zhì),。振蕩后靜置，至上層出現(xiàn)清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無白色沉淀時,，向容量瓶加水至刻度,。

3.還原糖含量的測定：

過濾上述已定容的樣品液，取5mL 濾液,，再定容到100mL（此步視樣品的含糖量而定）,。取已稀釋的溶液2mL，與標準葡萄糖顯色法相同：加銅試劑2mL,，煮沸10min,，加砷鉬酸試劑2mL，振蕩2mL,，定容到15ml，620nm 波長下比色,，記下光密度OD620nm（至少重復(fù)兩次）,。

注意事項

常見問題