原理

葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中,，并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體,。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后,，葉綠素即游離出來,，游離葉綠素很不穩(wěn)定,，對(duì)光、熱較敏感；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素,，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇,。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a 和b，兩者均易溶于乙醇,、乙-醚,、丙酮和氯仿。

葉綠素的含量測(cè)定方法有多種,，其中主要有：

1.原子吸收光譜法：通過測(cè)定鎂元素的含量,，進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量。

2.分光光度法：利用分光光度計(jì)測(cè)定葉綠素提取液在最大吸收波長(zhǎng)下的吸光值,，即可用朗伯—比爾定律計(jì)算出提取液中各色素的含量,。

葉綠素a 和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有最大吸收，且兩吸收曲線相交于652nm 處,。因此測(cè)定提取液在645nm,、663nm、652nm 波長(zhǎng)下的吸光值,，并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a,、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。

材料與儀器

步驟

1.取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或干材料,，擦凈組織表面污物,，去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g,，放入研缽中,，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95％乙醇，研成均漿,，再加乙醇10mL,，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3——5min,。

2.取濾紙1張置于漏斗中,，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗,，濾液流至100mL 棕色容量瓶中,；用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,，最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?/p>

3.用滴管吸取乙醇,，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止,。最后用乙醇定容至100mL,，搖勻,。

4.取葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)665nm、645nm 和652nm 下測(cè)定吸光度,，以95％乙醇為空白對(duì)照,。

注意事項(xiàng)

常見問題