1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基（RPMI1640 800 ml,，F(xiàn)BS 200 ml，2 mmol/L-谷氨酰胺,，5 μg/ml 兩性霉素,，50 μg/ml 慶大霉素）

2. 取 15 ml 無菌離心管，加 3 ml Histo-paque1077（Sigma）,，在其上加 4 ml 稀釋血,，分離淋巴細(xì)胞。

3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘,，棄上層清亮血漿,。

4. 收集不透明淋巴細(xì)胞層,，細(xì)胞懸液倒入 50 ml 無菌離心管。

5. 20 ml RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗兩次,，室溫 300 g 離心 10 分鐘,。

6. 10 ml 血分離的細(xì)胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

7. 細(xì)胞懸液（1.0 ml）放入 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶,，垂直放置,，37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小時(shí)。

8. 孵育后,，加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，水平放置，使細(xì)胞均勻分布于全生長(zhǎng)面,。

9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，不要吸出原培養(yǎng)基。

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EB 病毒轉(zhuǎn)化成淋巴細(xì)胞

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