假期太快結(jié)束,，又到了復蘇細胞開始實驗的環(huán)節(jié)了 ,，以下是整理的一些復蘇細胞的注意事項：

1. 細胞儲存在液氮中,，溫度達-196℃,，理論上儲存時間是無限的,。只要一直在液氮,，凍存沒有問題，那么復蘇也不會出現(xiàn)很大的問題，不存在有效期限,，而且可能發(fā)生的是,，細胞保存的時間越久，可能代次越靠前哦,，細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,，復蘇一定越快越好，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力,。

2. 取細胞時應做好防護措施,，帶好防凍手套，護目鏡,。細胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸,。

3. 必須在1-2min內(nèi)使凍存液完-全融化,，復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷,。如果凍存管的壁較厚,，隔熱效果較好,，可以適當提高水浴溫度（37℃~40℃）,。凍存液建議選用進口產(chǎn)品，如原代細胞凍存液復蘇時細胞成活率高,，DMSO含量為5%,并添加海藻糖和丙二醇以及細胞生長因子,，細胞成活更高.

4. 提前預定超凈臺，減少復蘇后插在冰盒里等待的時間,。復蘇后若需要長時間（>1h）等待,，建議往離心管加15ml以上培養(yǎng)基搖勻以稀釋DMSO給細胞帶來的毒性作用。對于不離心直接加入培養(yǎng)基培養(yǎng)的方法,，培養(yǎng)基的加入量是個需要考慮的問題,。主要涉及DMSO的濃度，一般DMSO含量為5%的細胞,，在7.5ml的完-全培養(yǎng)基里不受影響,，細胞可正常生長（這招很管用哦）。

5. 關(guān)于細胞溶解后,，是否需要離心的問題,，需要根據(jù)特定的細胞情況而定。主要有兩種方式,。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),，第二天換液（后貼壁后即換液）。因為離心的目的是兩個，去除DMSO,，去除死細胞,，這個是標準流程。但對一般人來說,，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了,，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,，死亡。此外在操作過程中容易污染,。另一種是須離心后,，將凍存液倒干凈，且一定要倒干凈,。懸浮細胞和貼壁比較慢的細胞一定要離心等特殊培養(yǎng)方式的細胞,。

6. 有些細胞復蘇后一星期才有起色，切忌要有耐心,，不要換液,，耐心等待，兩周后再做決定,。不要復蘇三四天后,，細胞沒有任何動靜，認為失敗,，倒掉所有細胞,。技術(shù)復蘇后各種花式優(yōu)待它就是不長，然后大家都不想理它了,，放了一周多拿出來,，竟然長滿了。

以上就是本期的內(nèi)容,，更多資訊,，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究,、活體動物轉(zhuǎn)染,、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領域客戶,，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務,；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化,、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細胞無毒性影響,、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務,，努力發(fā)展為基因治療,、細胞治療的生物科技企業(yè)。