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細(xì)胞活性測(cè)定方法大全

時(shí)間:2023/1/10閱讀:2298
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代謝增殖測(cè)定



MTT檢測(cè)法

活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),,并沉積在細(xì)胞中,死細(xì)胞則無此現(xiàn)象,。接著用二甲基亞砜(DMSO)溶解沉積在細(xì)胞中的甲瓚后,,可利用酶標(biāo)儀490nm波長(zhǎng)測(cè)光吸收值,依據(jù)吸光值(OD值)計(jì)算出活細(xì)胞數(shù)量,。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),,吸光值與細(xì)胞活性成正比。

△ 圖例



XTT檢測(cè)法

與MTT原理相似,,皆是利用添加物與活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),,并利用酶標(biāo)儀測(cè)定產(chǎn)物光吸收值;不同于MTT法的是,,XTT法還原產(chǎn)物是水溶性的橙黃色甲肷,,不需經(jīng)過二甲基亞砜(DMSO)溶解步驟,即可直接測(cè)定光吸收值,,操作較MTT方便快速,。當(dāng)XTT與電子耦合劑作用后產(chǎn)生的水溶性甲肷吸光值與活細(xì)胞數(shù)成正比。

△ 圖例



DNA合成增殖實(shí)驗(yàn)


BrdU檢測(cè)法

BrdU為胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,,可用于標(biāo)記活細(xì)胞中新合成的DNA(細(xì)胞活性周期S期),,BrdU可隨著DNA復(fù)制進(jìn)入子細(xì)胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的細(xì)胞DNA都會(huì)帶有BrdU標(biāo)記,,可通過抗BrdU單克隆抗體檢測(cè),,借此檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力,但BrdU單克隆抗體檢測(cè)過程需要將部分DNA變性,,使部分雙股解開成單股才能順利檢測(cè),。且BrdU為光敏性,因此需要在光線刺激較低(黑暗)的環(huán)境下操作,,并避光培養(yǎng),。

△ 圖例



EdU檢測(cè)法

EdU原理跟BrdU檢測(cè)法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,,T)滲入正在復(fù)制的DNA中,,并加入能與EdU反應(yīng)的熒光染料,即可利用檢測(cè)熒光值偵測(cè)細(xì)胞增殖,,或在細(xì)胞組織級(jí)別作為標(biāo)記追蹤等研究,,實(shí)驗(yàn)過程不需要經(jīng)過BrdU檢測(cè)法的DNA變性處理。

△ 圖例


化學(xué)發(fā)光細(xì)胞活性測(cè)定


ATP發(fā)光法

ATP是細(xì)胞的能量直接來源,,ATP發(fā)光法是通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP含量來分析細(xì)胞增殖,。市面上的原理是利用外源的螢火蟲熒光素(Luciferin)與熒光素酶(Luciferase),以細(xì)胞內(nèi)含的ATP為能量來源,,發(fā)生氧化反應(yīng)產(chǎn)生生物冷光,,因此可通過監(jiān)測(cè)冷光光度,來對(duì)應(yīng)ATP含量并判斷細(xì)胞增殖狀況,。

△ 圖例



熒光染料增殖實(shí)驗(yàn)


CFSE檢測(cè)法

CFSE是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料,,具有細(xì)胞膜通透性,能夠自由進(jìn)入細(xì)胞,;當(dāng)CFSE擴(kuò)散穿過細(xì)胞膜,,會(huì)與細(xì)胞內(nèi)源酯酶產(chǎn)生水解反應(yīng)而被激發(fā),,發(fā)出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會(huì)進(jìn)一步與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合,,形成穩(wěn)定的胞內(nèi)熒光蛋白,。每當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行分裂增殖,胞內(nèi)熒光蛋白會(huì)被平均分配到下一代細(xì)胞中,,因此細(xì)胞熒光強(qiáng)度會(huì)隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低,,可用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步檢測(cè)分析得出細(xì)胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,,對(duì)于最終判斷細(xì)胞增殖結(jié)果有直接性的影響,。

△ 圖例



臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)


臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)計(jì)數(shù)法

臺(tái)盼藍(lán)是一種藍(lán)色細(xì)胞活性染料,無法通過結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,;但細(xì)胞死后,,喪失細(xì)胞膜穩(wěn)定性,臺(tái)盼藍(lán)會(huì)進(jìn)入細(xì)胞將細(xì)胞染成藍(lán)色,,因此在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,,常規(guī)地搭配自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)板,應(yīng)用于分辨活細(xì)胞和死細(xì)胞,、及檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性,。

△ 圖例



Orangu™細(xì)胞計(jì)數(shù)


Orangu™計(jì)數(shù)法

Orangu™ solution是一種無細(xì)胞毒性、高靈敏度,、比色法,,用于測(cè)定細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的細(xì)胞活性試劑。利用WST-8(細(xì)胞代謝的一種水溶性的四唑鹽)在細(xì)胞內(nèi)線粒體脫氫酶作為電子介質(zhì)的情況下,,它被還原為橙色的甲瓚染料,,且產(chǎn)生甲瓚染料的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間成正比。操作簡(jiǎn)單快速,,結(jié)果可重復(fù),。

△ 圖例



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