直接從生物體內(nèi)獲取組織細(xì)胞進(jìn)行的首-次培養(yǎng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng),。原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系的第一步,，是從事培養(yǎng)工作的人員應(yīng)熟悉和掌握的最基本的技術(shù),。根據(jù)培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細(xì)胞培養(yǎng)法。

材料與儀器

小鼠
DMEM DMEM 胰酶 PBS
飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng) 離心管 6 孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器

步驟

一,、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 將小鼠斷頸致死,，置 75%酒精泡2-3 秒鐘，取肝臟,，置于盛有 PBS 的平皿中,。

2. 剔除脂肪、結(jié)締組織,、血液等雜物,，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有 PBS 液的平皿中。

3. 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約 1mm2),，玻片研磨,，轉(zhuǎn)到離心管，離心(1000 rpm,，5 min),。

4. 視組織或細(xì)胞量加額加入5-6 倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化 20 分鐘,，每隔 5 分鐘振蕩一次,，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離,。

5. 加入3-5 ml 含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用,。

6. 用100 目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊,。

7. 再次離心5 min,，棄上清液。

8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml,，沖散細(xì)胞,，再離心一次，棄上清液,。

9. 加入含血清的培養(yǎng)液 1-2 ml (視細(xì)胞量),，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

10. 將細(xì)胞調(diào)整到5x105/ml 左右,，轉(zhuǎn)移至6 孔培養(yǎng)板中,，37℃下培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 自取材開始,，保持所有組織細(xì)胞處于無菌條件,。細(xì)胞計(jì)數(shù)可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。

2. 在超凈臺(tái)中,，組織細(xì)胞,、培養(yǎng)液等不能暴露過久,，以免溶液蒸發(fā)。

3. 凡在超凈臺(tái)外操作的步驟,，各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,，以防止細(xì)菌落入。

4. 操作前要洗手,，進(jìn)入超凈工作臺(tái)后要用75％酒精或0.2％新潔爾滅擦拭手,。試劑瓶口也要擦拭。

5. 點(diǎn)燃酒精燈,，操作在火焰附近進(jìn)行,，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(zhǎng),，以免退火,，且冷卻后才能夾取組織。吸取過營(yíng)養(yǎng)液的用具不能再燒灼,，以免燒焦形成碳膜,。

6. 操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快,，以防空氣流動(dòng),，增加污染機(jī)會(huì)。

7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分,，工作臺(tái)面上的用品擺放要布局合理,。

8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。

9. 吸溶液的吸管等不能混用,。

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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化,、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對(duì)細(xì)胞無毒性影響,、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療,、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。

小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

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