1. 室溫下,，2 000~4 000 g 離心5 min,，將植物原生質(zhì)體細(xì)胞收集于1.5 ml 的微量離心管中，棄去上清,。

2. 往細(xì)胞沉淀加50 μl 低滲緩沖液,，在旋渦混合器上劇烈振蕩，將離心管置于-70℃ 15 min以上,，或置于干冰/乙醇浴中5 min 以凍結(jié)樣品,。融解樣品，在室溫下13 000 g 離心2 min,，將上清移入一個(gè)干凈管中,。

3. 對(duì)于分析50 μl 細(xì)胞提取液，配置如下CAT分析混合液

20 μl 0.01 μCi/μl ［3H］氯霉素
5 μl 5 mg/ml 丁酰輔(酶)A
5 μl 2 mol/l Tris·Cl,，pH8.0
20 μl H2O

4. 對(duì)每組分析,，將50 μl CAT分析混合液加入50 μl 細(xì)胞提取液中。37℃溫育30~90 min,。

5. 用200 μl 2：1的TMPD/二甲苯劇烈報(bào)蕩提取乙?；穆让顾兀x心并移出上層液相至一只閃爍瓶中,。

6. 樣品中加3~5 ml 閃爍液，計(jì)數(shù)測(cè)定CAT的活性,。

同實(shí)驗(yàn)其他方法

CAT活性的層析分析法

1. 100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞,，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液,。將細(xì)胞置于冰浴5 min,。 2. 用橡膠

原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

1. 60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2 ml PBS洗1次,。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液,，在室溫下溫育2~5 min。 2. 吸去低滲緩沖液，加入400 μl T

人生長(zhǎng)激素的放射免疫分析法

1. 取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl,。 2. 加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中,。加入100 μl 125I-

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CAT活性的相-抽提分析法

材料與儀器

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