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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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時(shí)間:2021/12/14閱讀:1140
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材料與儀器

動(dòng)物組織
PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE
離心機(jī) 搖床 研缽

步驟


1.  切下組織并立即剪成小塊,置于液氮中凍結(jié),。
 
2.  將200 mg~1 g 的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎,,或用錘子將其搗為細(xì)粉末,,每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
 
3.  500 g 離心細(xì)胞5 min,,棄上請(qǐng),。貼壁生長細(xì)胞先用胰酶消化。

4.  細(xì)胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸,,500 g 離心5 min,,棄上清,重復(fù)1次,。

5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細(xì)胞,。
 
6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。
 
7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品,,1 700 g 離心10 min,。

8.  如果樣品溶解得不好, 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液,,并重復(fù)離心,。

9  如果在界面上有一層厚的白色物質(zhì),重復(fù)有機(jī)抽提,,將上層(水溶液)轉(zhuǎn)移至一個(gè)新管中,。
 
10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉,1 700 g 離心2 min,。
 
11.  用70%乙酵洗滌,,晾干,沉淀用TE,。

12.  緩沖液重新溶解,,使終濃度在約1 mg/ml 左右。


注意事項(xiàng)

1.  如果是用肝組織,,要除去膽囊,,因其含有高水平的各種消化酶。

以上就是本期的內(nèi)容,,更多資訊,,歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。


安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染,、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),;提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),,努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。


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