在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題,，這些問題從細(xì)胞生長角度來說,，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢,、生長不好,，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法,。

一,、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁

可能原因： 

●胰蛋白酶消化過度 ；

●支原體污染 ,；

●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）,；              

●細(xì)胞老化 ；

●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 ,。

解決方法： 

●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度,； 

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體,。清潔支架或培養(yǎng)箱,。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，丟棄培養(yǎng)物；

●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ,；

●啟用新的保種細(xì)胞 ,；

●調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

二,、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因： 

●培養(yǎng)液中含鈣,、鎂離子 ；

●支原體污染,；

●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解,；

●DNA污染 。

解決方法： 

●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液,；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體,；

●用DNaseI處理細(xì)胞,。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢

可能原因：

●由于更換不同培養(yǎng)液或血清,； 

●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞,； 

●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 

●試劑保存不當(dāng),； 

●接種細(xì)胞起始濃度太低,； 

●細(xì)胞已老化； 

●支原體污染 ,。

解決方法： 

●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液,； 

●換入新鮮配置培養(yǎng)液,，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子；

●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物,；

●血清需保存在-10到-20℃,。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,，需在1周內(nèi)用完,；

●增加接種細(xì)胞起始濃度； 

●換用新的保種細(xì)胞,； 

●分離培養(yǎng)物,，檢測支原體,。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，丟棄培養(yǎng)物,。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好

可能原因：

●細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多,，細(xì)胞老化,；

細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢,；

細(xì)胞傳代時(shí)間過晚：細(xì)胞中毒,，影響傳代后的細(xì)胞生長；

胰酶消化時(shí)間過長或過短：時(shí)間過長,，細(xì)胞死亡,；時(shí)間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán),，細(xì)胞死亡,；

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染,；

霉菌污染。

●培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證,；

選擇的培養(yǎng)基是否合適,；

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

●培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常,；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確,。

解決方法：

根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對性的解決方案

●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù),、接種量等,；

●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法,、可溯源的血清）,；

●要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗(yàn)證,；

●注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境,。

五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因： 

●培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2,； 

●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大,； 

●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷； 

●培養(yǎng)液滲透壓不正確,； 

●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 ,。

解決方法： 

●檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2,； 

●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度； 

●取新的保存細(xì)胞種,； 

●檢測培養(yǎng)液滲透壓,； 

●換入新鮮培養(yǎng)液。

以上就是本期的內(nèi)容,，更多資訊,，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染,、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。