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SD大鼠
苯巴（匕匕）妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培養(yǎng)液
離心管 培養(yǎng)箱 手術(shù)器材
一,、 取14.5d SD大鼠一只,。
二、 苯巴（匕匕）妥0.5 ml 腹腔注射,，待麻醉后置于手術(shù)臺(tái)上,，酒精棉球消毒皮膚，開(kāi)腹取出子宮（約12-14個(gè)）,，放入解剖液中,，剖開(kāi)子宮，取出胚胎,，放入解剖液中,，在耳眼之間離斷，取頭側(cè)部組織,，去除腦膜組織,，取原始中腦區(qū)組織，放入離心管裝的解剖液中,，待全部取出后,，1500轉(zhuǎn)2分鐘。
三,、 用吸管吸出上清液,，在組織細(xì)胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室溫30分鐘,，1500轉(zhuǎn),，離心5分鐘（離心前可加入解剖液以終止胰酶作用）。
四,、吸去上清,，在組織細(xì)胞沉淀中加入Dnase 一管（2 ml/vial），37℃反應(yīng)10分鐘,，1500轉(zhuǎn),，離心5分鐘，吸去上清,，在組織細(xì)胞沉淀中加入2 ml DM培養(yǎng)液吹打,，計(jì)數(shù)（計(jì)數(shù)公式為（N1+N2+N3+N4）/4x104），以3x105個(gè)/瓶在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，做好標(biāo)記（時(shí)間,、原代的還是第幾代傳代，姓名,，細(xì)胞名稱(chēng)等）,，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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