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SD大鼠
苯巴（匕匕）妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培養(yǎng)液
離心管 培養(yǎng)箱 手術(shù)器材
一、 取14.5d SD大鼠一只。
二,、 苯巴（匕匕）妥0.5 ml 腹腔注射,，待麻醉后置于手術(shù)臺上,，酒精棉球消毒皮膚,，開腹取出子宮（約12-14個），放入解剖液中,，剖開子宮,，取出胚胎，放入解剖液中,，在耳眼之間離斷,，取頭側(cè)部組織，去除腦膜組織,，取原始中腦區(qū)組織,，放入離心管裝的解剖液中，待全部取出后,，1500轉(zhuǎn)2分鐘,。
三、 用吸管吸出上清液,，在組織細胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室溫30分鐘,，1500轉(zhuǎn),，離心5分鐘（離心前可加入解剖液以終止胰酶作用）。
四,、吸去上清,，在組織細胞沉淀中加入Dnase 一管（2 ml/vial）,，37℃反應(yīng)10分鐘，1500轉(zhuǎn),，離心5分鐘,，吸去上清，在組織細胞沉淀中加入2 ml DM培養(yǎng)液吹打,，計數(shù)（計數(shù)公式為（N1+N2+N3+N4）/4x104）,，以3x105個/瓶在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，做好標記（時間,、原代的還是第幾代傳代,，姓名，細胞名稱等）,，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
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